Cy3荧光染料标记的链霉亲和素的制备介绍

Cy3荧光染料标记的链霉亲和素（Streptavidin-Cy3）是一种用于生物标记和检测的分子，结合了链霉亲和素的强结合能力和Cy3的荧光特性。以下是其制备过程的基本步骤和要点：

制备步骤

链霉亲和素的准备：

从商业供应商获取纯化的链霉亲和素，通常为粉末状态。根据说明书将其溶解于适当的缓冲液中（如PBS缓冲液），调节浓度至所需水平。

Cy3染料的溶解：

获取Cy3荧光染料，通常为干粉。用适当的溶剂（如无水DMSO或去离子水）溶解Cy3，制备出所需浓度的染料溶液。

链霉亲和素与Cy3的反应：

将Cy3染料溶液逐渐加入链霉亲和素溶液中，通常在保护性氛围（如氮气或氩气）下进行，避免染料降解。

反应条件（如pH值、温度和反应时间）需根据Cy3的性质和链霉亲和素的活性进行优化。常用的反应条件包括中性pH（约7.0）和室温下反应1-2小时。

反应终止和清洗：

反应完成后，通过透析、凝胶过滤或超滤等方法去除未结合的Cy3染料，以纯化标记的链霉亲和素。

确保去除多余的染料以避免背景荧光干扰。

标记物的浓度测定：

通过紫外-可见分光光度计测定标记物的浓度和标记效率，确保标记的链霉亲和素在所需的浓度范围内。

保存和存储：

将制备好的链霉亲和素-Cy3溶液分装并在低温（-20°C或-80°C）保存，避免反复冻融。

注意事项

反应条件：Cy3对pH和温度敏感，确保在适当条件下进行反应，以提高标记效率。

荧光稳定性：标记后的链霉亲和素应尽量避光保存，防止荧光衰减。

验证标记成功：可以通过荧光显微镜或其他荧光检测技术验证链霉亲和素的标记情况。

应用领域

生物成像：用于细胞成像、组织成像等，帮助观察生物过程。

生物传感器：在生物传感器中用于检测生物分子。

靶向药物传递：结合特定靶标，实现精准的药物传递。