亲和纯化蛋白标签6xHis（polyhistidine）

产品名称：亲和纯化蛋白标签6xHis（polyhistidine）

1. 什么是6xHis标签？

定义：6xHis标签是由6个连续组氨酸（Histidine, His）残基组成的短肽序列（HHHHHH），通过基因工程手段融合到目标蛋白的N端或C端。

作用：利用组氨酸侧链的咪唑基团与镍（Ni²⁺）或钴（Co²⁺）等金属离子形成可逆结合，实现目标蛋白的亲和纯化。

2. 6xHis标签的纯化原理

金属螯合层析：

固定相：层析柱中填充含Ni²⁺或Co²⁺的螯合树脂（如Ni-NTA、Ni-IDA）。

结合：组氨酸的咪唑基团与金属离子形成配位键，目标蛋白被特异性吸附。

洗脱：通过提高咪唑浓度或降低pH值破坏金属-组氨酸结合，释放目标蛋白。

3. 6xHis标签的优势

通用性强：适用于多种蛋白，无需优化特异性抗体。

操作简便：一步纯化，结合洗脱条件灵活（如pH梯度、咪唑浓度）。

对蛋白影响小：标签短（仅6个氨基酸），对蛋白结构、功能干扰极小。

成本低：层析介质可重复使用，适合大规模生产。

4. 纯化流程

样品准备：

细胞裂解液需含去垢剂（如Triton X-100）或高盐（如2 M NaCl）以减少非特异性结合。

添加蛋白酶抑制剂（如PMSF）防止降解。

结合：

样品上柱，室温或4℃结合1-2小时。

洗涤：

用低咪唑浓度（如20 mM）缓冲液去除杂蛋白。

洗脱：

高咪唑浓度（如250-500 mM）缓冲液洗脱目标蛋白。

再生：

用EDTA螯合金属离子，再生树脂。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

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