CY7标记链霉亲和素,Cy7-Streptavidin的简单制备说明
CY7标记链霉亲和素,Cy7-Streptavidin
链霉亲和素缓冲液置换:将链霉亲和素溶解在初始缓冲液中,通过透析或凝胶过滤色谱法,将缓冲液置换为 pH 7.4 的磷酸盐缓冲液,去除原缓冲液中的杂质及可能影响标记反应的成分,获得纯净的链霉亲和素溶液。
CY7 - NHS 酯准备:将 CY7 - NHS 酯溶解于适量的二甲基亚砜(DMSO)中,制备成浓度适宜的溶液。由于 CY7 - NHS 酯在水溶液中不稳定,DMSO 可保持其活性。
标记反应:在室温、避光条件下,将 CY7 - NHS 酯的 DMSO 溶液缓慢加入到链霉亲和素溶液中,边加边搅拌。链霉亲和素分子表面含有多个赖氨酸残基,其氨基可与 CY7 - NHS 酯的 N - 羟基琥珀酰亚胺基团发生亲核取代反应。反应持续 4 - 6 小时,期间可通过测量反应体系在特定波长下的吸光度变化来监测反应进程。
产物纯化:反应结束后,采用尺寸排阻色谱法对反应混合液进行分离。使用 Sephadex G - 50 等凝胶柱,以磷酸盐缓冲液为流动相,收集含有标记链霉亲和素 Cy7 - Streptavidin 的洗脱液,去除未反应的 CY7 - NHS 酯和其他杂质。通过十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS - PAGE)检测标记链霉亲和素的纯度和分子量变化,利用荧光分光光度计测定其荧光强度,评估标记效率和链霉亲和素的活性。
名称:CY7标记链霉亲和素,Cy7-Streptavidin
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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仅供科研,不能用于人体实验AXC.2025.03.04