PKH26荧光染料的化学结构与性质以及染色方法

PKH26荧光染料的化学结构与性质以及染色方法

1. 化学结构与性质

PKH26是一种红色荧光染料，化学式为C₅₉H₉₇IN₂，分子量为961.34。它能够稳定地结合到细胞膜的脂质区域，发出明亮的红色荧光，其激发波长为551nm，发射波长为567nm。PKH26具有高脂溶性，能够轻易穿透细胞膜，对细胞毒性较小，荧光背景低，且不会影响细胞的正常生理功能。

2. 应用领域

- 细胞标记与示踪：PKH26广泛用于体外和体内的细胞标记与示踪研究。它能够与细胞膜稳定结合，形成持久的荧光标记，使得标记的细胞在生长周期内都能保持荧光信号。例如，在细胞迁移和侵袭研究中，PKH26可用于标记肿瘤细胞，通过细胞划痕实验或Transwell实验评估其迁移和侵袭能力。

- 细胞增殖研究：PKH26可用于检测细胞增殖。在细胞分裂过程中，荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中。通过流式细胞仪，可以根据荧光强度的不同检测出未分裂细胞、分裂一次、二次、三次及更多分裂次数的细胞。

- 外泌体标记：PKH26还可用于标记外泌体。外泌体是细胞分泌的微小囊泡，参与细胞间通讯和疾病发生发展。通过PKH26标记外泌体，可以研究其在细胞间的传递和功能。

- 其他应用：PKH26还可用于研究细胞吞噬作用、细胞间膜的转移、抗原呈递、细胞粘附以及组织切片中的神经元迁移。

3. 染色方法

- 储备液制备：将1mg PKH26溶解在1mL DMSO中，得到1mM储备液。储备液建议在-20°C或-80°C避光保存，避免反复冻融。

- 工作液配制：用无血清细胞培养基或PBS按1:50或1:100稀释储备液，得到5-10μM的工作液。

- 细胞染色：对于悬浮细胞，将细胞密度调整为1×10⁶/mL，加入1mL工作液，室温孵育10-45分钟，然后用PBS洗涤。对于贴壁细胞，将细胞培养在盖玻片上，加入100μL工作液，轻摇覆盖细胞，室温孵育5-30分钟，再用培养基洗涤。

4. 优点

- 高稳定性：PKH26的荧光信号明亮且稳定，即使在长时间观察和实验中也不会因荧光衰减而影响细胞追踪效果。

- 不影响细胞功能：标记后的细胞仍然保持正常的生物学活性和功能，不会干扰细胞实验的结果。

- 高灵敏度和特异性：PKH26能够在很低的浓度下标记细胞，具有高灵敏度和特异性。

- 持久的荧光信号：PKH26染料能够与细胞膜稳定结合，标记细胞在生长周期内都能保持荧光信号，无需再次染色。

5. 注意事项

- PKH26试剂为DMSO溶液，在低温时会凝固，需要加热融解后使用。

- 染色工作液需要现配现用，不能提前配制，以避免染料水解和变质。

- 染色过程中需要控制适当的孵育时间和温度，以确保染料与细胞膜的结合效果。

- 洗涤步骤应优化，以确保既去除多余染料又不破坏细胞的结构和功能。

PKH26作为一种高效的细胞膜标记染料，因其高稳定性、低毒性以及持久的荧光信号，在细胞生物学、医学研究以及药物递送等领域具有广泛的应用前景。