CY7-Thrombin，CY7标记凝血酶的合成及纯化过程特点

CY7-Thrombin，CY7标记凝血酶的合成及纯化过程特点

CY7-Thrombin是通过将近红外荧光染料Cyanine7（CY7）与凝血酶（Thrombin）共价偶联形成的标记蛋白。凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶，具有特异性底物识别和催化活性，其结构包含多种可反应残基，为荧光标记提供了偶联位点。CY7标记赋予其近红外荧光性能，使其在酶活性研究、蛋白追踪及药物载体研究中得到应用。

合成及纯化过程特点：

蛋白准备

凝血酶通过重组表达系统或商业提纯获得，缓冲液置于pH 7–8以保证活性残基暴露。

蛋白溶液浓度通常为1–5 mg/mL，经过透析或过滤除去杂质和低分子盐类。

染料活化与溶解

CY7染料一般采用NHS酯形式活化，溶解于DMSO或缓冲液中。

活化染料可在反应中与蛋白氨基残基形成稳定酰胺键，保证标记效率。

溶液避光处理，防止光漂白。

偶联反应

将活化CY7与凝血酶混合，摩尔比一般为染料:蛋白=3–6:1。

反应在室温或低温条件下进行数小时至过夜，保持蛋白折叠和活性。

缓冲液离子强度和pH对偶联效率和蛋白稳定性有重要影响。

纯化过程

通过透析、超滤或凝胶过滤去除未结合的CY7染料。

可利用层析技术（如亲和层析或凝胶过滤）进一步分离单一标记分子，确保均一性。

纯化后的CY7-Thrombin溶液呈均匀分散状态，荧光信号稳定。

表征方法

UV-Vis光谱和荧光光谱：确认染料偶联成功并检测荧光强度。

SDS-PAGE及色谱分析：评估蛋白完整性、标记均一性及分子量分布。

动态光散射（DLS）：分析溶液分散性和聚集状态。

应用特点

CY7-Thrombin适用于蛋白追踪、酶活性监测及近红外成像。

荧光标记不干扰酶催化活性，为体外实验及载体功能研究提供可靠工具。

标记蛋白稳定性和可控偶联密度保证了实验可重复性和信号强度。

产品名称：CY7-Thrombin，CY7标记凝血酶

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc