Cy5.5-NHS，1469277-96-0，花菁染料CY5.5标记N-羟基琥珀酰亚胺酯的反应条件特点

Cy5.5-NHS，1469277-96-0，花菁染料CY5.5标记N-羟基琥珀酰亚胺酯的反应条件特点

Cy5.5-NHS是一种含有N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS）的活性花菁染料，可通过酰胺化反应将Cy5.5荧光团共价连接至含氨基的分子（如蛋白质、多肽或氨基功能化小分子）。其远红外荧光特性（吸收约675 nm，发射约695 nm）使其在生物标记、成像及追踪实验中具有优势。为了实现高效偶联，需控制反应条件以保持活性并避免副反应。

反应条件特点

溶剂与溶解性

Cy5.5-NHS对水敏感，易水解失活，通常在无水有机溶剂（如DMSO、DMF或干燥乙腈）中溶解。在反应中，应尽量减少水分暴露，以延长活性时间。标记底物可在含少量缓冲液或有机溶剂混合体系中进行反应。

pH控制

NHS酯与氨基反应效率受pH影响。佳反应条件为弱碱性（pH 7.5–8.5），既可保持氨基的亲核性，又可减少NHS酯水解。使用磷酸盐缓冲液或碳酸氢盐缓冲液常见，但应避免含游离硫醇或强酸性环境，以免降低反应效率。

底物浓度与摩尔比

Cy5.5-NHS通常与底物氨基按1.2–3倍摩尔比加入，确保足够标记效率。底物浓度较低时，需延长反应时间；浓度较高时，需注意溶解性和荧光团自聚。

温度与反应时间

反应一般在室温或低温（4–25°C）下进行，避免高温导致荧光团降解。反应时间可从30分钟到数小时，根据底物类型、浓度及溶剂条件优化。

水解与副反应控制

NHS酯易被水解生成羧酸，使标记效率下降。反应体系应保持低水分，并在反应完成后立即进行纯化。对于敏感蛋白，可添加低浓度的有机溶剂或保护剂减轻降解。

纯化与储存

反应完成后，通过凝胶过滤、透析或HPLC纯化Cy5.5标记产物，去除未反应的Cy5.5-NHS及副产物。纯化后的标记物应避光低温储存（–20°C或–80°C），可溶于缓冲液或有机溶剂，保证荧光稳定性。

总结

Cy5.5-NHS作为远红外荧光标记试剂，通过酰胺化与氨基反应实现分子标记。反应条件包括无水环境、弱碱性pH、适宜摩尔比和温度控制，能够保证高效偶联和荧光稳定性。其应用于蛋白质标记、抗体荧光标记及生物分子可视化研究。

产品名称：Cy5.5-NHS

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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仅用于科研，不能用于人体。小编axc