CY5.5-Avidin,花菁染料CY5.5标记亲和素的反应活性特点
CY5.5-Avidin,花菁染料CY5.5标记亲和素的反应活性特点
CY5.5-Avidin 是通过将近红外荧光染料 CY5.5 与亲和素(Avidin)蛋白偶联形成的标记蛋白。亲和素是一种高分子四聚体蛋白,能够与生物素形成强烈的非共价结合(Kd ≈ 10^-15 M),在分子识别和检测体系中应用。CY5.5-Avidin 的制备通常利用亲和素中赖氨酸残基的 ε-氨基或半胱氨酸的巯基与 CY5.5 活性衍生物(如 NHS 酯或马来酰亚胺)进行共价偶联,从而赋予亲和素可视化的荧光特性。
反应活性特点
NHS 酯偶联
CY5.5-NHS 酯可与亲和素赖氨酸 ε-氨基反应,形成稳定酰胺键。
反应温和,通常在 pH 7.0–8.5 的缓冲液中进行,避免蛋白质变性。
反应效率高,可通过调节摩尔比控制标记密度,保持亲和素的生物活性。
马来酰亚胺偶联
CY5.5-MAL 可与亲和素表面游离巯基发生 Michael 加成反应,生成稳定硫醚键。
对于巯基有限或定向标记需求,可实现选择性标记,保护结合位点活性。
反应条件控制
温和搅拌、室温或轻微加温(25–30℃),避免高温或端 pH 破坏亲和素结构。
偶联比可调,通过优化反应摩尔比,确保标记荧光强度与亲和素结合活性平衡。
活性验证
标记后的 CY5.5-Avidin 保持对生物素的高亲和力,可通过生物素结合实验或荧光结合实验验证。
荧光光谱可检测 CY5.5 信号,确认偶联成功。
SDS-PAGE 与荧光扫描可评估标记程度和蛋白完整性。
应用优势
CY5.5-Avidin 可作为荧光探针在生物成像、免疫检测及分子标记实验中应用。
结合 CY5.5 的近红外荧光特性,可实现低背景、高灵敏度的检测和活体成像。
高选择性偶联保证亲和素核心功能不受影响,可与生物素修饰的分子或材料结合,实现特异性靶向。
综上,CY5.5-Avidin 通过 赖氨酸或巯基的共价偶联实现荧光标记,保持亲和素生物活性,同时提供近红外荧光功能,可应用于分子识别、标记追踪及药物递送系统中。
产品名称:CY5.5-Avidin,花菁染料CY5.5标记亲和素
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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仅用于科研,不能用于人体。小编axc