AF488蛋白标记试剂盒的操作流程

产品名称：AF488蛋白标记试剂盒的操作流程

1. 核心特性

光谱属性：

激发波长：495 nm（兼容蓝光激光或氙灯/汞灯的488 nm通道）。

发射波长：519 nm（绿色荧光，适合荧光显微镜、流式细胞仪、微孔板检测等）。

光稳定性：高亮度、抗光漂白，适合长时间成像或高通量实验。

溶解性：水溶性，pH稳定（pH 4-10），兼容多种缓冲体系。

化学活性：

NHS酯（琥珀酰亚胺酯）：与蛋白质/抗体上的赖氨酸残基（-NH₂）反应，形成稳定酰胺键。

标记效率：通常可达1-10个染料分子/蛋白质分子，具体取决于蛋白浓度、反应条件及纯化步骤。

2. 试剂盒典型组成

染料组分：Alexa Fluor 488 NHS Ester（固体或DMSO溶液）。

反应缓冲液：碳酸氢钠缓冲液（pH 8.3）或专用标记缓冲液，优化反应pH以促进胺-NHS酯偶联。

纯化试剂：脱盐柱（如Zeba™ Spin Desalting Columns）、透析袋或凝胶过滤柱，用于去除未结合染料及游离染料。

辅助试剂：可能包含淬灭剂（如Tris-HCl）、储存缓冲液（如PBS）、抗氧化剂（如NaN₃）等。

说明书与协议：详细操作步骤、反应条件优化建议、质量控制方法（如分光光度计检测标记效率）。

3. 操作流程（以抗体标记为例）

准备待标记蛋白：

抗体或蛋白需溶于无氨基缓冲液（如PBS），避免Tris、甘氨酸等含胺缓冲液干扰反应。

推荐蛋白浓度：1-10 mg/mL（具体取决于蛋白大小及标记需求）。

溶解染料：

将NHS酯染料溶于无水DMSO或DMF（终浓度通常为10 mM），避免反复冻融。

偶联反应：

按染料:蛋白摩尔比（通常1:1至20:1）将染料溶液加入蛋白溶液中，轻柔混合。

室温避光反应1-2小时（或4℃过夜），反应过程中避免剧烈搅拌以防蛋白变性。

纯化标记产物：

通过脱盐柱、透析或超滤去除游离染料及小分子杂质，同时置换至储存缓冲液（如PBS）。

可通过SDS-PAGE、分光光度计（检测A280/A495比值）或荧光扫描验证标记效率。

储存与稳定性：

标记后的蛋白通常储存于含防腐剂（如0.02% NaN₃）的PBS中，4℃避光保存，保质期数月至一年（具体取决于蛋白稳定性）。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

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