Activated R-Phycoerythrin,活性R-藻红蛋白的核心定义与化学本质
产品名称:Activated R-Phycoerythrin,活性R-藻红蛋白的核心定义与化学本质
1. 核心定义与化学本质
基础属性:R-Phycoerythrin(R-PE)是从红藻(如Polysiphonia urceolata)中提取的荧光蛋白,分子量约240 kDa,由α、β、γ亚基组成,典型结构为(αβ)₆γ或(αβ)₃γ。活化形式通过化学修饰(如SMCC处理)引入马来酰亚胺基团,使其能与含巯基(-SH)的生物分子(如抗体、蛋白质)共价结合。
活化机制:SMCC(琥珀酰亚胺基4-(N-马来酰亚胺甲基)-环己烷-1-羧酸酯)与R-PE的赖氨酸残基反应,引入马来酰亚胺基团,后者可与目标分子的巯基(-SH)发生“点击化学”反应,形成稳定酰胺键。
2. 荧光特性与光谱优势
光谱参数:激发波长450-500 nm(主峰496/546/565 nm),发射波长575±5 nm(橙红色荧光),量子产率高,荧光强度是荧光素的5-10倍,Stokes位移大(约20-30 nm),避免生物样本自发荧光干扰。
光稳定性:在pH 4-10范围内稳定,适合活细胞长时间成像(如共聚焦显微镜、流式细胞术),但需避光保存以防淬灭。
3. 活化方法与偶联工艺
活化流程:R-PE经SMCC处理后,马来酰亚胺基团暴露,可直接与含巯基的抗体、酶、核酸等生物分子偶联,无需额外前处理。反应条件温和(室温、pH 6.5-7.5),1小时内完成。
纯化要求:偶联后需通过凝胶过滤(如Sephadex G-25)或透析去除游离染料,减少背景荧光。活化R-PE通常不含硫酸铵等杂质,适合直接使用。
4. 核心应用场景
生物标记:用于抗体、链霉亲和素、生物素的荧光标记,构建荧光探针,支持FRET(荧光共振能量转移)实验、双色/多色荧光分析。
细胞成像:适用于流式细胞术(检测细胞表面抗原)、荧光显微镜(亚细胞定位、活细胞追踪)、免疫荧光染色(组织切片、细胞内结构可视化)。
诊断与检测:在ELISA、微阵列、活体成像中作为高灵敏度荧光标签,用于病原体检测、肿瘤标志物分析、药物筛选等。
功能探针:与量子点、金纳米颗粒等复合,构建多功能探针,用于多参数分析、动态监测。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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