活化R-藻红蛋白,活化R型藻红蛋白的使用规范与注意事项
产品名称:活化R-藻红蛋白,活化R型藻红蛋白的使用规范与注意事项
1. 反应机制与偶联工艺
偶联原理:马来酰亚胺基团与目标分子的巯基(-SH)发生迈克尔加成,形成稳定硫醚键,反应速率比与胺基快1000倍,特异性强。
活化流程:SMCC处理后,可直接与含巯基的抗体、酶、核酸等偶联,无需额外前处理。反应条件温和(室温、pH 6.5-7.5),1小时内完成。
纯化要求:偶联后需通过凝胶过滤(如Sephadex G-25)或透析去除游离染料,减少背景荧光。
2. 核心应用场景
生物标记:用于抗体、链霉亲和素、生物素的荧光标记,构建荧光探针,支持FRET实验、双色/多色荧光分析。
细胞成像:流式细胞术(细胞分群、定量分析)、荧光显微镜(亚细胞定位、活细胞追踪)、免疫荧光染色(组织切片、细胞内结构可视化)。
诊断与检测:ELISA、微阵列、活体成像中作为高灵敏度荧光标签,用于病原体检测、肿瘤标志物分析、药物筛选等。
功能探针:与量子点、金纳米颗粒复合,构建多功能探针,用于生物传感器、蛋白质相互作用研究。
3. 使用规范与注意事项
储存条件:避光、-20℃以下干燥保存,溶解后分装使用,避免反复冻融;4℃可短期保存(≤6个月),勿冻结。
操作安全:佩戴防护装备(手套、护目镜),废弃物按实验室生物危害规范处理。
实验设计:优化偶联比例(如抗体:R-PE=1:3-1:10),通过SDS-PAGE或荧光光谱验证偶联效率;避免接触强还原剂(如DTT)或变性剂(如尿素)。
质量控制:使用前检测荧光强度、纯度(如HPLC或质谱),确保无游离染料残留。
4. 优势与局限性
优势:
高灵敏度与亮度:荧光强度高,适合低丰度靶标检测。
易操作性:活化后即开即用,偶联效率高,无需复杂前处理。
生物相容性:低毒性,对细胞活性影响小,适合活细胞实验。
光谱兼容性:宽激发/发射范围,适配多激光器(如488 nm、561 nm)。
局限性:
稳定性限制:对还原剂、变性剂敏感,需避免强还原环境。
分子量影响:大分子量(240 kDa)可能影响亚细胞结构穿透性。
储存要求:需低温避光保存,操作需谨慎以避免降解。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

关于我们:
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