FITC-Phalloidin的使用方法与操作要点,CAS 915026-99-2
产品名称:FITC-Phalloidin的使用方法与操作要点,CAS 915026-99-2
1. 物质定义与结构
化学本质:荧光素(FITC)与鬼笔环肽(Phalloidin)的共价结合物,分子式为C₅₆H₆₀N₁₀O₁₅S₂,分子量约1177.26。
鬼笔环肽特性:源自毒蘑菇鬼笔鹅膏(Amanita phalloides)的七肽毒素,以高亲和力(Kd=20nM)特异性结合纤维状肌动蛋白(F-actin),不结合单体肌动蛋白(G-actin),且无物种限制。
2. 光谱特性
激发/发射波长:490-495nm(激发)/518-520nm(发射),呈现绿色荧光,兼容FITC滤片系统(如荧光显微镜、共聚焦显微镜)。
荧光稳定性:光稳定性中等,需避光操作;荧光强度高,背景噪声低,适合多色标记(如与DAPI共染)。
3. 核心应用场景
细胞骨架成像:标记细胞内微丝(F-actin),观察细胞形态、动态变化(如细胞迁移、分裂)及骨架结构。
组织学与免疫荧光:用于固定组织切片、细胞培养物的染色,结合其他荧光探针(如TRITC、Cy5)进行多色分析。
流式细胞术:定量分析细胞表面或内部F-actin的表达水平。
药物筛选与毒性评估:评估化合物对细胞骨架的影响(如药物诱导的形态变化、毒性测试)。
4. 使用方法与操作要点
样品处理:需固定(如3.7%-4%甲醛或多聚甲醛)和通透(如Triton X-100)以增强渗透性。
染色条件:
浓度:通常5-10μg/mL,根据实验体系调整。
时间:室温30-60分钟,或4℃过夜以减少非特异性结合。
缓冲液:常用PBS或HBSS,需避免氨基(如赖氨酸)竞争性结合。
储存与复溶:避光、-20℃保存,复溶后分装避免反复冻融;工作液现配现用。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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