Tide Quencher 4WS马来酰亚胺,TQ4WS-MAL的FRET探针开发应用
产品名称:Tide Quencher 4WS马来酰亚胺,TQ4WS-MAL
1. 结构与化学特性
淬灭核心:TQ4WS属于Tide Quencher系列第四代暗淬灭剂,采用高共轭芳香基团设计,吸收峰集中在450-550nm,对绿/黄/橙色荧光染料(如FAM、Cy3、ROX)具有高淬灭效率(消光系数达10⁵ M⁻¹cm⁻¹),且自身无自发荧光,信噪比显著优于传统DABCYL或BHQ系列。其宽吸收光谱(覆盖450-800nm)支持与红光/近红外染料(如Cy5、Alexa Fluor 594)配对,适用于长波长FRET探针。
马来酰亚胺基团:通过硫醚键与蛋白质/多肽中的巯基(-SH)特异性反应,实现快速无铜标记(反应速率10³ M⁻¹s⁻¹),生物相容性良好,适合活细胞/体内标记。
连接方式:常通过柔性PEG链或直接共价键连接淬灭核心与马来酰亚胺,确保空间适配性与反应活性。分子量约500-600 Da,水溶性良好,需-20℃避光保存。
2. 核心应用场景
FRET探针开发:作为淬灭模块与荧光团(如Tide Fluor系列)构建分子信标、qPCR探针、SNP检测探针等。例如,在TaqMan探针中,靶标核酸杂交会分离荧光团与TQ4WS-MAL,解除淬灭,触发荧光信号,用于实时PCR定量或基因突变检测。
蛋白质标记与成像:通过马来酰亚胺与抗体/酶的半胱氨酸残基反应,实现特异性标记,应用于免疫分析、双抗检测、活细胞荧光显微镜及肿瘤靶向成像(如与近红外染料联用降低背景噪声)。
酶活性监测:通过荧光信号变化追踪蛋白酶切割、DNA杂交或分子相互作用,如监测酶切反应动力学或蛋白质构象变化。
纳米载体与药物递送:修饰纳米颗粒或脂质体,实现靶向成像与药效评估,提升药物开发效率。
3. 合成与操作要点
合成路径:通常由TQ4WS的羧酸/NHS酯衍生物与马来酰亚胺-PEG-胺通过酰胺键偶联,反应在无水DMSO/DMF中进行,pH 7.5-8.5,室温反应1-2小时,产物通过透析或层析纯化。
操作规范:需严格避水(NHS酯易水解),避免强光/高温;生物应用前验证标记物的生物相容性;活细胞实验需优化标记浓度与反应时间,确保细胞活性。
质量控制:通过HPLC或质谱验证纯度(≥95%),测试淬灭效率与标记效率,确保实验可靠性。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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