AMCA NHS ester的合成与纯化方法,CAS:113721-87-2
产品名称:AMCA NHS ester的合成与纯化方法,CAS:113721-87-2
1. 化学结构与核心特性
分子标识:化学式为C₁₆H₁₄N₂O₆,分子量约330.3,属于氨基甲基香豆素(AMCA)的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯衍生物。其结构由7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸与NHS酯基团结合,形成共价结合的荧光标记物。
光谱特性:激发波长345-353 nm,发射波长435-455 nm,呈现明亮的蓝色荧光,Stokes位移约100 nm,光稳定性高,量子产率约0.91,适合长时间成像。
反应活性:NHS酯基团与生物分子中的伯胺基团(如蛋白质赖氨酸侧链、氨基修饰的核酸或表面)在pH 7-9条件下特异性反应,形成稳定的酰胺键。
溶解与储存:溶于DMSO、DMF等有机溶剂,部分溶于水;需避光干燥保存于-20℃,避免反复冻融和水解失效。
2. 生物应用场景
蛋白质标记:用于免疫荧光、Western blot、流式细胞术及细胞内定位追踪。例如,标记抗体研究免疫细胞功能,或标记酶探究蛋白质相互作用。
核酸标记:标记氨基修饰的寡核苷酸、引物或探针,应用于荧光原位杂交(FISH)、实时定量PCR及基因表达分析。
多标记实验:作为蓝色荧光探针,与绿色(如FITC)或红色(如罗丹明)荧光染料联用,实现双色/三色标记,适用于共聚焦显微镜、流式细胞仪及高通量筛选。
生物分子检测:在蛋白质印迹、免疫测定、药物开发及纳米材料修饰中用于追踪和定量生物分子,如构建荧光生物传感器或靶向药物载体。
3. 合成与纯化方法
合成路径:通过7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸与NHS在活化剂(如DCC)作用下酯化合成,需精确控制温度、溶剂及催化剂,确保官能团位置特异性。
纯化技术:采用柱层析、高效液相色谱(HPLC)或凝胶过滤去除未反应物和副产物,产物需通过核磁共振(NMR)、质谱(MS)及荧光光谱验证结构与光学性能。
质量控制:商业化产品纯度通常≥95%,需通过HPLC-MS和荧光光谱验证。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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