钙离子荧光探针FLUO-2 AM，Ca荧光探针，钙信号追踪的条件
钙离子荧光探针FLUO-2 AM，Ca荧光探针，钙信号追踪的条件
FLUO-2 AM 是一种广泛应用于细胞生物学和生理学研究中的钙离子荧光探针，用于动态追踪细胞内游离 Ca²⁺ 浓度变化。其命名中的 “AM” 表示该探针以乙酰氧基甲基酯（acetoxymethyl ester）形式存在，使分子能够穿透细胞膜并在细胞内通过酯酶水解释放有效荧光活性的 FLUO-2。该探针属于绿光荧光探针，激发波长约 488 nm，发射波长约 520 nm，能够实时反映细胞内 Ca²⁺ 浓度变化，是研究钙信号传导、神经活动及肌肉收缩的重要工具。
化学组成与结构特点方面，FLUO-2 AM 是由荧光素核心衍生物修饰而成，其结构包含芳香族荧光核心、羧酸配位基团和可水解的 AM 酯修饰。荧光核心通过共轭体系赋予分子荧光特性，而羧酸基团是钙离子络合位点，使探针在 Ca²⁺ 存在下发生激发和发射的可逆变化。AM 酯修饰通过中和羧酸负电荷，增加探针的疏水性，从而使其能够透过细胞膜进入细胞内。进入细胞后，内源性非特异性酯酶水解 AM 酯，将羧基还原为原有负电荷，形成能够结合 Ca²⁺ 的有效探针分子。
分子性质主要包括以下几点：
细胞膜穿透性：FLUO-2 AM 的乙酰氧基甲基酯修饰有效中和羧基负电荷，使探针在水溶液中保持中等疏水性，能够被动扩散穿透细胞膜。
水溶性与稳定性：在未水解状态下，FLUO-2 AM 在有机溶剂（如 DMSO）中溶解性良好，便于制备储备液和实验操作。水解后形成的 FLUO-2 分子水溶性提高，能够在细胞质或缓冲体系中稳定存在。
荧光特性：FLUO-2 AM 水解生成的 FLUO-2 可与 Ca²⁺ 形成络合物，激发波长约 488 nm，发射波长约 520 nm。钙结合使荧光强度显著增强，呈现典型的单波长荧光响应，可用于定量和定性分析细胞内 Ca²⁺ 信号。
钙离子结合特性：FLUO-2 对 Ca²⁺ 的亲和力适中，能响应生理范围内的细胞钙浓度变化，适合神经元、肌细胞及非肌细胞的钙信号研究。其结合是可逆反应，可实时反映钙离子动态变化。
钙信号追踪条件包括实验设计、探针使用及成像环境控制等方面：
探针使用浓度：一般在 1–5 μM 范围内加入培养细胞或组织，以确保充分进入细胞且避免毒性。
负载条件：FLUO-2 AM 溶解于 DMSO 并可与少量吐温-20（Tween-20）混合，提高分子均匀性和细胞膜穿透效率。负载时间通常为 20–60 分钟，视细胞类型和膜通透性而定。
水解激活：探针进入细胞后需依赖内源性酯酶水解 AM 酯生成活性分子，通常在生理温度（37°C）下孵育 15–30 分钟以完成水解。
成像条件：采用激发波长 488 nm 的激光或光源，发射波长收集在 510–530 nm 之间。实验过程中需控制光照强度和曝光时间，避免光漂白。
缓冲体系要求：在 Ca²⁺ 信号研究中，细胞外缓冲液需维持生理 pH（约 7.2–7.4）和离子浓度，避免影响探针荧光或细胞功能。可适当加入 Ca²⁺ 缓冲剂以控制实验条件。
数据处理：FLUO-2 AM 的单波长荧光强度可直接反映 Ca²⁺ 浓度变化，通常通过荧光强度随时间变化曲线进行分析，也可结合校正体系进行相对定量。
产品名称：钙离子荧光探针FLUO-2 AM
纯度：95%+
性状：固体或液体
储藏条件：-20°C干燥避光保存
包装规格：50mg 100mg 250mg 500mg（按需提供）
厂家：齐岳生物
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