Cy5.5 WGA的合成与衍生
产品名称:Cy5.5 WGA的合成与衍生
1. 核心定义与结构
Cy5.5:近红外荧光染料(全称Cyanine5.5),激发波长675-695 nm,发射波长695-715 nm,具有低背景荧光和高信噪比特性,适用于深层组织成像。
WGA:小麦胚芽凝集素(Wheat Germ Agglutinin),特异性识别细胞膜表面的糖蛋白(如N-乙酰葡糖胺),广泛用于细胞标记、糖生物学研究。
Cy5.5 WGA:通过共价偶联形成的荧光探针,结合Cy5.5的光学特性与WGA的生物识别能力,实现细胞表面糖蛋白的可视化追踪。
2. 合成方法与步骤
偶联原理:Cy5.5的活性基团(如NHS酯)与WGA的氨基(赖氨酸残基或N端)形成稳定酰胺键。
典型合成流程:
缓冲液准备:WGA溶解于pH 8.0的0.1 M NaHCO₃缓冲液,确保氨基去质子化增强亲核性。
染料活化:Cy5.5 NHS酯溶于无水DMSO,避免水解失效。
偶联反应:按1:3-1:10摩尔比(WGA:染料)混合,室温避光反应30-60分钟,使用EDC/NHS促进酰胺键形成。
终止与纯化:加入Tris缓冲液终止反应,通过Sephadex G-25凝胶层析或透析去除游离染料,保留标记产物。
质量检测:UV-Vis光谱测定标记度(dye/protein ratio),荧光光谱验证光学特性,质谱/NMR确认结构。
优化条件:
温度:25℃避光反应,避免高温导致蛋白变性。
pH:6.5-8.5,维持氨基活性与染料稳定性。
溶剂:无水DMSO或DMF,避免水相导致NHS酯水解。
3. 衍生应用与扩展
生物成像:
活细胞标记:用于流式细胞术、共聚焦显微镜观察细胞膜糖蛋白分布。
组织穿透成像:近红外特性适合体内深层组织成像(如肿瘤微环境研究)。
药物递送追踪:
载体标记:与脂质体、纳米颗粒偶联,追踪药物递送路径与释放动力学。
药物偶联:如Cy5.5-Artesunate(青蒿琥酯偶联物),实现药物分布与疗效的可视化评估。
功能化修饰:
点击化学:Cy5.5炔基衍生物通过CuAAC反应与叠氮基分子结合,构建多模块探针。
靶向修饰:与抗体、肽链或适配体结合,增强靶向特异性(如肿瘤靶向成像)。
材料科学:
表面功能化:标记生物材料(如水凝胶、支架)表面,研究细胞-材料相互作用。
荧光探针开发:结合FRET(荧光共振能量转移)技术,设计传感器检测生物分子互作。

关于我们:
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