ATTO 620 NHS Ester的反应条件优化

产品名称：ATTO 620 NHS Ester的反应条件优化

1. 结构特性

荧光核心：基于ATTO 620染料，激发波长约620–623 nm，发射波长约642–645 nm（深红色区域），斯托克斯位移约22–24 nm，有效降低背景干扰。量子产率约0.50，光稳定性良好，适用于长时间成像。

反应基团：NHS酯（N-羟基琥珀酰亚胺酯）特异性识别生物分子中的伯胺基团（-NH₂），形成稳定的酰胺键，确保标记特异性。

分子参数：分子量约609–709 g/mol，固体粉末形态，易溶于DMSO、DMF、水等溶剂，需避光干燥保存。

2. 化学性质

反应条件：在pH 7.0–9.0的缓冲液中，室温或4°C下与伯胺基团高效反应，生成稳定酰胺键。碱性环境（pH>9）易导致NHS酯水解失效，酸性环境（pH<7）则降低反应速率。

稳定性：在pH 2–11范围内荧光性质稳定，耐受温度波动与光照，-20°C避光保存可维持12个月以上活性。

特异性：主要靶向伯胺基团，但可能与其他亲核基团发生副反应，需优化反应条件以减少非特异性结合。

3. 应用场景

生物标记：广泛用于抗体、蛋白质、肽段、氨基修饰的寡核苷酸及核酸的荧光标记，适用于流式细胞术、共聚焦显微镜、超分辨率成像（如PALM、dSTORM、STED）等技术。

细胞成像：活细胞/固定细胞标记、荧光原位杂交（FISH）、细胞追踪及动态过程监测，尤其在深红色区域可减少自发荧光背景，提升信噪比。

多色标记：与AF系列（如AF488、AF647）、ATTO其他染料（如ATTO 594、ATTO 647）联用，实现多通道荧光检测，互不干扰。

活体成像：近红外特性（发射波长642–645 nm）适合深层组织成像，穿透力强，背景干扰低。

4. 反应条件优化

pH控制：严格控制在7.0–9.0范围，避免碱性水解或酸性反应抑制。

温度与时间：室温（20–25°C）反应30分钟至2小时，或4°C过夜以减少副反应。

溶剂选择：推荐使用无水DMSO或DMF配制储备液，分装后避光保存，避免水溶性溶剂（如直接用水溶解）导致沉淀。

预处理要求：标记前需用TCEP/DTT还原目标分子的二硫键，并通过脱盐柱去除多余还原剂，防止竞争性结合。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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