Calcein AM /PI 细胞双染试剂盒的核心原理与机制

产品名称：Calcein AM /PI 细胞双染试剂盒的核心原理与机制

核心原理与机制

活细胞标记：Calcein AM（乙酰甲氧基甲酯修饰的钙黄绿素）具有疏水性，可穿透活细胞膜。进入细胞后，被胞内酯酶水解为Calcein（钙黄绿素），发出强绿色荧光（Ex=490nm，Em=515nm）。由于死细胞缺乏酯酶，Calcein AM仅标记活细胞。

死细胞标记：碘化丙啶（PI）无法穿透完整活细胞膜，但可进入死细胞（膜通透性增加）并与DNA结合，发出红色荧光（Ex=535nm，Em=617nm）。两者均可被490nm激发，实现活/死细胞同时荧光成像。

试剂盒组成与规格

主要成分：Calcein AM溶液（浓度通常1mM，工作浓度1-10μM）、PI溶液（浓度1mM，工作浓度1-10μM）、缓冲液（如PBS或专用Assay Buffer）。

规格与纯度：常见规格5mg、10mg、25mg，纯度≥95%。储存需-20℃以下避光、干燥，避免反复冻融。

配套工具：部分试剂盒含细胞刮刀、离心管、荧光显微镜滤片（490nm激发/515nm发射用于活细胞，535nm激发/617nm发射用于死细胞）。

操作步骤与优化

细胞准备：

贴壁细胞：胰酶消化后离心收集，PBS洗涤2-3次去除残留酯酶。

悬浮细胞：直接离心收集，同法洗涤。

细胞密度：调整至1×10⁵~1×10⁶细胞/ml，避免过高密度影响染色均匀性。

染色工作液配制：

按说明书比例混合Calcein AM和PI（如2μM Calcein AM + 4μM PI），加入缓冲液（如5ml PBS），现配现用，当天用完。

需避光操作，避免染料降解。

孵育与观察：

37℃避光孵育15-30分钟，使染料充分作用。

荧光显微镜：490nm激发同时观察活（绿）死（红）细胞；545nm激发单独观察死细胞。

流式细胞仪/酶标仪：定量分析荧光强度，评估细胞活性比例。

洗涤与保存：

可选PBS洗涤去除游离染料，减少背景干扰。

染色后细胞可短期保存于4℃避光环境，但建议尽快检测。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，良好有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。 我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。

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