FITC-Casein,异硫氰酸荧光素标记酪蛋白的合成与纯化
产品名称:FITC-Casein,异硫氰酸荧光素标记酪蛋白的合成与纯化
基础信息与化学结构
定义与组成:FITC-Casein是由天然乳蛋白——酪蛋白(Casein)与荧光染料异硫氰酸荧光素(FITC)通过共价偶联形成的荧光标记蛋白复合物。FITC通过与酪蛋白分子中的游离氨基(如赖氨酸残基)反应,形成稳定的硫脲键(–NH–CS–NH–),保留酪蛋白的生物活性同时引入绿色荧光信号。
酪蛋白特性:酪蛋白是牛奶中的主要磷蛋白,以胶束结构存在,富含磷酸化丝氨酸和疏水氨基酸,具有良好的乳化性、吸附性及生物相容性。其分子量因类型(αs1、β、γ、κ-酪蛋白)而异,整体分子量范围约20-25 kDa。
FITC荧光特性:激发波长495 nm,发射波长519-520 nm,呈现明亮的绿色荧光,光稳定性良好,适合荧光显微镜、流式细胞术及光谱分析。
合成与纯化
合成方法:
化学偶联法:将酪蛋白溶解于弱碱性缓冲液(如0.1 mol/L碳酸氢钠,pH 8.3-9.5),加入FITC的有机溶剂溶液(如DMSO),室温反应2-4小时。FITC的异硫氰酸基与酪蛋白氨基反应形成共价键。
纯化步骤:通过透析(截留分子量10 kDa)或凝胶过滤层析(如Sephadex G-25)去除游离FITC,直至透析液无荧光残留,获得高纯度产物。
反应优化:弱碱环境(pH 8-9)促进反应效率,避免强酸/强碱破坏蛋白结构;反应后需彻底清洗以减少非特异性结合。
物理化学性质
溶解性:水溶性良好,可溶于DMSO、DMF等有机溶剂,兼容PBS、Tris等生物缓冲体系。
稳定性:需-20℃以下避光、干燥保存,避免反复冻融;现配现用,防止吸潮或降解。在生理条件下(如细胞培养液)稳定,适合长期实验。
光谱特性:绿色荧光信号强,背景噪声低,适合多色荧光实验中的通道区分。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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