AF430 Conjugate Streptavidin，荧光染料偶联链霉亲和素的介绍

AF430 Conjugate Streptavidin，荧光染料偶联链霉亲和素的介绍

AF430 Conjugate Streptavidin 是将荧光染料 Alexa Fluor 430（AF430）与链霉亲和素（Streptavidin）共价偶联形成的标记分子，结合了高亮度绿色至蓝绿色荧光与生物素特异性结合能力。在生物化学、分子成像及免疫检测中具有广泛应用。为了确保标记分子的功能性和稳定性，纯化与表征过程至关重要。本文对 AF430 Conjugate Streptavidin 的纯化与表征方法进行详细说明。

在偶联完成后，反应混合物通常包含 AF430 染料、游离 Streptavidin、未反应的活性酯以及偶联副产物。为了获得高纯度的偶联产物，首先需要去除未反应染料和小分子杂质。常用方法是通过凝胶过滤（gel filtration）或透析，将分子量较小的游离染料与大分子 Streptavidin 偶联物分离。凝胶过滤柱通常选择适合分离蛋白与小分子的分子筛材料，如 Sephadex G-25、G-50 等，在缓冲液体系中进行。透析则利用半透膜隔离小分子杂质，多次更换缓冲液可有效去除游离染料。

在纯化过程中，也可采用层析技术，如离子交换层析或亲和层析，以进一步提高产物纯度。例如，利用 Streptavidin 与生物素的高亲和力进行生物素化柱捕获，可去除未结合染料或部分失活蛋白。通过调节缓冲液盐度或 pH，可以实现有效洗脱，获得高纯度的 AF430 Streptavidin 偶联物。纯化后的产物应储存在适当缓冲液中（通常为 PBS 或 HEPES），并在低温避光条件下保存，以维持荧光强度和蛋白结构稳定性。

纯化后的 AF430 Conjugate Streptavidin 需要通过一系列表征手段确认结构完整性和功能活性。首先，可使用紫外-可见光分光光度法（UV-Vis spectroscopy）测定荧光染料的吸收峰，确认 AF430 的偶联情况。Alexa Fluor 430 的特征吸收峰位于约 430 纳米，可与蛋白质在 280 纳米的吸收峰进行比值分析，估算每个 Streptavidin 分子上的染料负载数（Dye-to-Protein Ratio, D/P）。

此外，荧光光谱分析用于确认偶联后的荧光性能是否保持稳定。激发波长约 430 纳米，发射波长约 540 纳米的特征荧光峰应明显存在，且峰形和荧光强度应与预期一致。对偶联产物的 SDS-PAGE 分析可以进一步验证蛋白质完整性，并结合凝胶荧光扫描确认荧光染料已成功附着在 Streptavidin 上。

功能性表征同样重要。AF430 Conjugate Streptavidin 的关键功能是高亲和力结合生物素，可通过生物素化分子捕获实验或 ELISA 型检测验证。通过与已知生物素标记底物结合并检测荧光信号，可确认偶联物不仅保持荧光特性，同时保留 Streptavidin 的生物功能。

产品名称：AF430 Conjugate Streptavidin 

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

产品目录

凋亡靶向探针 ZnDPA-Cy7

凋亡靶向荧光探针ZnDPA-Cy3

凋亡靶向荧光探针ZnDPA-Cy3.5

凋亡靶向荧光探针ZnDPA-Cy5

仅用于科研，不能用于人体。小编axc