AF546 蛋白标记试剂盒的操作关键步骤与注意事项

产品名称：AF546 蛋白标记试剂盒的操作关键步骤与注意事项

1. 核心属性与原理

荧光特性：AF546属于Alexa Fluor 546系列，为橙红色荧光染料，激发波长556nm，发射波长570nm，光稳定性优于Cy3，量子产率高，适合多色标记（如与AF488/AF647联用）。

标记机制：通过N-羟基琥珀酰亚胺酯（NHS酯）与蛋白质赖氨酸残基的氨基共价结合，形成稳定酰胺键。适用于分子量≥40kDa的蛋白质（如IgG抗体、伴刀豆球蛋白A等）。

试剂盒组成：包含荧光染料（NHS酯形式）、预填充纯化柱/滤过浓缩管、标记缓冲液、清洗液及置换液等，部分产品含磁力搅拌器配件。

2. 典型应用场景

流式细胞术：标记抗体用于细胞表面/胞内蛋白定量分析，如免疫表型检测。

荧光显微成像：活细胞/固定细胞及组织切片的高分辨率成像，配合共聚焦/超分辨率显微镜使用。

免疫组化（IHC）：组织切片中抗原定位，需优化抗体浓度（如50-200μg/mL）。

分子互作研究：结合生物素-链霉亲和素系统（如Streptavidin-AF546），用于蛋白追踪、核酸杂交（FISH）及纳米材料标记。

多重标记实验：与AF488/AF647等染料联用，实现多通道信号区分，减少光谱重叠。

3. 操作关键步骤与注意事项

样品准备：蛋白需纯化且不含胺类缓冲液（如Tris），分子量≥40kDa。建议使用不含胺基的缓冲液（如PBS或HEPES）溶解。

标记反应：37℃孵育20-30分钟，需控制染料与蛋白比例（通常1:1-5:1摩尔比），避免过度标记导致荧光淬灭。

纯化与回收：通过离心过滤或凝胶过滤去除未结合染料，纯化柱回收率≥90%。

储存与稳定性：-20℃以下避光保存，避免反复冻融；分装小份使用，防止染料降解。

对照设置：需设未染色样本及竞争抑制对照（如添加α-甘露糖），验证特异性。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，良好有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。 我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。

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