Alexa Fluor 647 甲基四嗪，AF 647的典型应用场景

产品名称：Alexa Fluor 647 甲基四嗪，AF 647的典型应用场景

1. 核心属性与原理

荧光特性：AF647为近红外荧光染料，激发波长647–650 nm，发射波长668–670 nm，具有高亮度、光稳定性及pH不敏感性（pH 4–10），适合深层组织成像。

生物正交反应：甲基四嗪基团通过逆电子需求Diels-Alder（IEDDA）反应与含反式环辛烯（TCO）的分子快速结合，反应速率常数达10³–10⁵ M⁻¹s⁻¹，适用于活细胞标记。

化学结构：AF647荧光团与甲基四嗪共价连接，甲基修饰增强四嗪环稳定性，减少非特异性反应。

2. 典型应用场景

生物正交标记：

细胞成像：标记TCO修饰的抗体、核酸探针，用于共聚焦/超分辨显微镜（如STORM/PALM）实现单分子定位。

活体成像：结合TCO-靶向分子，用于活体动物模型的多模态成像（如PET/MRI/荧光三模态）。

蛋白质定位：追踪细胞内蛋白动态，如受体、酶的定位与互作研究。

多重标记实验：与AF488、AF546等染料联用，实现多通道信号区分，适用于流式细胞术、免疫组化、Western blot等。

纳米材料标记：修饰纳米颗粒、量子点，用于生物传感器或药物递送系统追踪。

3. 操作关键步骤与注意事项

标记反应：

TCO修饰：TCO-NHS ester与抗体在pH 8.5缓冲液中反应，纯化后获得TCO-Ab。

点击反应：AF647-Me-Tetrazine与TCO-Ab按2:1至5:1摩尔比混合，在PBS（pH 7.4）中室温避光反应5–30分钟。

纯化与回收：使用脱盐柱（如Zeba Spin）去除游离染料，纯化回收率≥90%。

储存与稳定性：-20℃以下干燥、避光、分装保存，避免反复冻融；分装小份使用，防止染料降解。

对照设置：设未标记样本及竞争抑制对照（如添加TCO-抑制剂），验证特异性。

安全规范：仅用于科研，操作时佩戴防护装备；废弃物按危险废物处置。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，良好有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。 我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。

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