Annexin V AF680的操作关键步骤与注意事项

产品名称：Annexin V AF680的操作关键步骤与注意事项

1. 核心属性与原理

荧光特性：AF680为近红外荧光染料，激发波长679nm，发射波长702nm，光稳定性良好，背景干扰低，组织穿透力强，适合深层成像及活体检测。

生物学特性：Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白（分子量35-36 kDa），特异性结合凋亡早期外翻至细胞膜外侧的磷脂酰丝氨酸（PS），通过钙离子介导实现高亲和力结合（纳摩尔级灵敏度）。

复合物结构：通过化学偶联将AF680的NHS酯与Annexin V的赖氨酸残基共价结合，形成稳定复合物，保留蛋白活性及荧光特性。

2. 典型应用场景

细胞凋亡检测：

流式细胞术：区分早期凋亡（Annexin V⁺/PI⁻）与晚期凋亡/坏死（Annexin V⁺/PI⁺），常与PI、7-AAD联用。

荧光显微镜：活细胞动态成像、组织切片（冰冻/石蜡）定位定量，支持共聚焦/超分辨技术。

活体成像：小动物模型中原位监测凋亡分布（如肿瘤治疗、缺血损伤研究）。

多色标记与高内涵成像：与绿色/蓝色荧光探针（如FITC、DAPI）联用构建多通道体系，提升信噪比；结合自动化系统实现多参数分析。

药物研发与疾病模型：用于药物筛选、疾病机制研究（如癌症、神经退行性疾病）、治疗效果评价。

3. 操作关键步骤与注意事项

样品准备：

悬浮细胞直接收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化（避免钙离子螯合），洗涤去除残留酶。

细胞浓度控制在1-5×10⁵ cells/mL，避免过度消化导致假阳性。

染色与检测：

孵育体系：加入Annexin V AF680（终浓度5-10 μg/mL）和PI（终浓度1 μg/mL），室温避光孵育15分钟。

检测设置：流式细胞仪使用近红外通道（如700nm），显微镜需匹配滤光片。

储存与安全：

储存条件：-20℃避光干燥，分装使用，避免反复冻融。

安全规范：仅供科研使用，操作时佩戴手套、护目镜，废弃物按危险废物处置。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，良好有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。 我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。

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