5-CFDA,5-羧基荧光素双醋酸盐的生物医学应用
产品名称:5-CFDA,5-羧基荧光素双醋酸盐的生物医学应用
1. 化学结构与核心特性
分子式与结构:C₂₅H₁₆O₉,分子量460.39。结构包含荧光素核心,5号位引入羧基(-COOH),并带有两个乙酸酯基团(-OCOCH₃)。白色至黄色结晶或粉末,密度1.6±0.1 g/cm³,沸点693.1±55.0°C,溶于DMSO、乙醇、丙酮等有机溶剂。
荧光特性:本身无荧光,进入细胞后被非特异性酯酶水解为5-羧基荧光素(5-FAM),产生强绿色荧光(激发波长488nm,发射波长525nm)。水解产物带负电荷,滞留于细胞内,荧光强度与细胞活性正相关。
细胞渗透性:疏水性结构使其可自由穿透活细胞膜,水解后生成亲水性5-FAM,无法自由穿出细胞,实现细胞内标记。
2. 生物医学应用
细胞活性与功能检测:
活细胞标记:通过荧光显微镜、流式细胞术观察细胞形态、分布及动态变化(如干细胞归巢、肿瘤细胞迁移)。
细胞增殖与代谢:监测细胞增殖、迁移及代谢功能,如人椎间盘细胞标记实验中,5-CFDA处理组细胞存活率与对照组无差异,荧光信号可持续72小时以上。
细胞内pH检测:5-FAM荧光强度对pH敏感(pH 7-8范围内线性相关),可用于测定细胞内pH值。
细胞膜完整性评估:细胞膜受损时,5-CFDA无法进入,荧光信号减弱或消失。
分子标记与检测:
蛋白质/核酸标记:羧基可与氨基反应,用于标记抗体、多肽、寡核苷酸等生物分子,应用于蛋白质组学、免疫分析。
荧光传感器:构建荧光探针检测金属离子、生物分子或环境污染物。
疾病机制研究:在心血管疾病、炎症、肿瘤研究中,用于追踪细胞动态、评估药物靶标结合及代谢途径。
3. 合成与储存规范
合成路径:通过荧光素骨架的羧基化及乙酸酯化反应合成,具体步骤涉及有机合成化学(如羧基化试剂与荧光素偶联)。
储存条件:避光、干燥、-20°C以下保存,避免反复冻融。溶解后分装,现配现用(如10mM DMSO储备液稀释至1-10μM工作液)。
操作安全:有毒性(危险标识R45、R46、R23/24/25),需佩戴防护装备(手套、护目镜),在通风橱中操作,避免吸入或皮肤接触。废弃物按化学/生物安全规范处理。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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