AlexaFluor647-NHS，AF647-活性酯的反应原理
AlexaFluor647-NHS，AF647-活性酯的反应原理
Alexa Fluor 647-NHS是一种荧光活性化合物，由水溶性荧光染料Alexa Fluor 647（AF647）与N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯官能团结合而成。AF647具有吸收峰约650 nm、发射峰约668 nm的特性，荧光信号稳定、光漂白性低，水溶性良好。NHS酯是一种常用的活化化学基团，能够在温和条件下与亲核胺基反应形成稳定的酰胺键，使染料可以与蛋白质、多肽、氨基修饰的多糖或小分子实现共价偶联。AF647-NHS因此成为化学、生物材料和分子标记研究中广泛使用的工具。
化学结构与反应原理
AF647-NHS分子由荧光染料主体、柔性连接链和NHS活性酯组成。NHS酯是一种亲电子中心，能够被亲核试剂（如蛋白质赖氨酸残基上的游离氨基）攻击，形成稳定的酰胺键，同时释放NHS分子。该反应特性使AF647-NHS能够在温和条件下高效标记生物分子，不需要高温或强酸碱条件，从而保持被标记分子的功能性和结构完整性。
反应原理可以概括如下：
活化羧基
AF647羧基通过化学转化形成NHS酯，得到具有高反应性的活性中心。该羧基处于电子受体状态，使其能够与亲核胺基快速形成共价键。亲核攻击形成酰胺键
被标记分子上的游离胺基作为亲核试剂攻击NHS酯碳原子，生成稳定的酰胺键，并释放NHS分子。这一共价连接确保荧光染料固定在目标分子上，减少非特异性解离或荧光损失。温和条件与可控性
偶联反应通常在pH 7.0–8.5的缓冲液（如PBS或碳酸盐缓冲液）中进行，室温或轻微加温即可完成。反应条件温和，兼顾反应效率与生物分子稳定性，可通过调节染料与分子的摩尔比控制标记密度。
化学应用
蛋白质标记
AF647-NHS广泛用于蛋白质的共价标记，尤其是含有赖氨酸残基或N端氨基的蛋白质。标记后的蛋白可用于荧光检测、免疫分析、荧光成像或蛋白动力学研究。多肽和小分子标记
除蛋白质外，AF647-NHS还可用于标记带有氨基修饰的多肽、小分子药物或多糖。通过酰胺键偶联，可赋予这些分子稳定荧光信号，实现可视化追踪和定量分析。生物材料功能化
AF647-NHS可用于生物材料表面修饰，例如水凝胶、多糖载体或纳米颗粒表面氨基官能团的荧光标记。这使得材料分布、载药行为和降解过程可通过荧光成像实时监测。实验可视化与分析
标记后的分子可用于共聚焦显微镜、流式细胞术、荧光成像及活体跟踪实验。NHS酯反应的高效率和特异性保证了荧光信号稳定，同时减少对分子功能和结构的影响。多重标记与正交化学
AF647-NHS可与其他荧光或功能基团结合，进行多通道实验设计，实现多分子同时检测。例如，可与叠氮修饰体系结合，进行正交标记，实现复杂生物体系的多重分析。
良林生物供应磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、磁性纳米颗粒、纳米金、近红外荧光染料、荧光量子点、碳纳米管、石墨烯及多种功能高分子材料。如有需求可咨询
产品名称：Alexa Fluor 647-NHS
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研
厂家：良林生物
产品目录
CY2-OVA CY2标记卵清蛋白
CY2-PDDA CY2邻苯二甲酸二乙二醇二丙烯酸酯
CY2-propofol CY2标记丙泊酚
CY2-protopanaxatriol CY2标记人参皂苷
仅用于科研，不能用于人体。小编axc