CY3-Nucleohistone，CY3标记的核组蛋白的反应机制

CY3-Nucleohistone，CY3标记的核组蛋白的反应机制

CY3-Nucleohistone（CY3 标记的核组蛋白）是通过将核组蛋白（nucleohistone）与 Cy3 荧光染料共价连接形成的复合分子，用于染色质研究、核蛋白动态追踪及细胞核结构分析。核组蛋白是一类与 DNA 高度结合的碱性蛋白，包括 H1、H2A、H2B、H3 和 H4 等核心组蛋白及链接组蛋白，它们在染色质结构维持、基因表达调控和核酸包装中发挥重要作用。Cy3 是一种三甲烯型花菁染料，由两个氮杂芳香环通过多甲烯链形成刚性 π 共轭结构，吸收峰约 550 nm，发射峰约 570 nm，可为核组蛋白提供稳定荧光信号，实现体外或细胞内的实时可视化分析。

CY3-Nucleohistone 的反应机制主要依赖于 Cy3 荧光团与核组蛋白上的可反应官能团之间的共价修饰。核组蛋白富含赖氨酸残基、精氨酸残基以及 N 端氨基，这些位点提供了良好的标记位置。标记过程通常采用 NHS 酯化 Cy3 或异氰酸酯形式的 Cy3，通过亲核取代反应与蛋白氨基形成稳定的酰胺键。该反应在弱碱性缓冲液（pH 7.5–8.5）中进行，室温条件下轻轻搅拌 1–2 小时，以确保标记均匀而不破坏蛋白折叠结构。

在反应过程中，氨基侧链的电子对攻击 Cy3-NHS 酯中的羰基碳，形成四面体过渡态，随后 NHS 基团离去生成稳定的酰胺键。该机制保证荧光团与核组蛋白牢固连接，同时保留蛋白的整体构象和 DNA 结合能力。为了防止非特异性标记或多重交联，反应通常控制 Cy3 与蛋白摩尔比，并通过缓冲体系和温度优化标记条件。

此外，为保护核组蛋白的生物活性，反应完成后通常加入含氨基的终止剂（如甘氨酸）中和剩余活化的 Cy3-NHS 酯，避免进一步非特异性反应。该步骤确保标记后蛋白仍能与 DNA 形成稳定的核小体结构，从而适用于染色质构象及蛋白-DNA 相互作用研究。

标记后的 CY3-Nucleohistone 可通过透析、凝胶过滤色谱（GFC）或高效液相色谱（HPLC）进行纯化，以去除未反应的 Cy3 分子及副产物。纯化后的标记蛋白通过紫外-可见光谱确认 Cy3 吸收峰，通过荧光光谱验证发射特性，同时通过 SDS-PAGE 或质谱确认蛋白完整性和标记效率。

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产品名称：CY3-Nucleohistone

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

厂家：良林生物

产品目录

CY7标记的亲和素 CY7-avidin

CY7标记的人血清白蛋白 Cy7-labeled human serum albumin

CY7标记的特定肽段 Cy7-KTSGPNQC

CY7标记的抑蛋白酶 CY7-Aprotinin-Protein

CY7标记的载脂蛋白 CY7-Apolipoprotein

仅用于科研，不能用于人体。小编axc