5-羧基-X-罗丹明 SE，5-Carboxy-X-Rhodamine SE，纯化与表征

5-羧基-X-罗丹明 SE，5-Carboxy-X-Rhodamine SE，纯化与表征

英文：5-Carboxy-X-Rhodamine SE

中文：5-羧基-X-罗丹明 SE

5-羧基-X-罗丹明 SE是一种功能化荧光染料衍生物，由罗丹明染料引入羧基（–COOH）并通过酯化或NHS酯（Succinimidyl Ester, SE）活化形成活性标记基团。罗丹明类染料属于可见光荧光染料，激发波长约为565 nm，发射波长约为580 nm，具有高量子产率和优异光稳定性。羧基引入提高了染料的水溶性，而SE活性酯为氨基或其他亲核官能团提供可控共价偶联位点，使其广泛用于蛋白质、肽链及其他生物分子的荧光标记。

在化学组成上，5-羧基-X-罗丹明 SE由三个部分构成：一是罗丹明染料核心，提供强荧光信号和优异光学性能；二是羧基修饰，增加水溶性并为SE活化提供反应位点；三是NHS酯活性基团，可与蛋白质或肽链中的氨基通过酰胺键形成稳定共价连接。在水溶液中，羧基可去质子化，提高染料溶解性，而SE酯在无水或低水分条件下保持活性，可在温和条件下进行偶联反应。

纯化与表征方面，5-羧基-X-罗丹明 SE常采用高效液相色谱（HPLC）进行纯化，以去除未反应染料、低分子杂质或水解产物。HPLC纯化通常使用反相C18柱，通过梯度洗脱实现高纯度分离。纯化后的产物通常呈深红色或橙红色粉末，溶于有机溶剂（如DMSO、DMF）或缓冲液中可形成均匀溶液。

表征方法主要包括光谱分析、质谱和核磁共振（NMR）。紫外-可见光光谱（UV-Vis）用于确定吸收峰及荧光特性；荧光光谱用于测定激发与发射波长及量子产率；质谱（MS）可确认分子量和偶联完整性；¹H NMR和¹³C NMR可用于验证羧基和SE官能团的结构完整性及化学环境。纯化和表征确保染料在后续标记实验中具有稳定性和可控性，同时保留荧光性能和化学活性。

在应用中，5-羧基-X-罗丹明 SE广泛用于蛋白质或肽链的荧光标记，可与细胞或生物体系兼容，用于荧光显微镜、流式细胞术、免疫标记及分子示踪研究。其SE活性酯可与氨基基团高效偶联，而羧基修饰提供良好水溶性和生物相容性，保证标记体系的稳定和信号强度。

综上所述，5-Carboxy-X-Rhodamine SE（5-羧基-X-罗丹明 SE，COOH-罗丹明）是一种结合高亮度荧光和可控化学偶联活性的染料。通过HPLC纯化和光谱及质谱表征，可获得高纯度、结构稳定的产物，广泛应用于蛋白质、肽链和生物分子的荧光标记与示踪研究，为生命科学和生物化学实验提供可靠的化学工具。

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