PcBlue NHS ester，PcBlue 琥珀酰亚胺酯的连接机制

产品名称：PcBlue NHS ester，PcBlue 琥珀酰亚胺酯的连接机制

1. 化学结构与荧光特性

分子基础：PcBlue NHS ester（CAS 215868-33-0）属于苯并吡喃类蓝色荧光染料，分子式为C₁₄H₇F₂NO₇，分子量约339.2。其核心结构包含：

苯并吡喃骨架：赋予蓝色荧光（激发峰410 nm，发射峰455 nm），组织穿透力强，背景荧光低。

NHS酯基团：作为活性反应基团，与生物分子的伯胺（-NH₂）发生特异性共价反应。

磺酸基：增强水溶性，减少非特异性吸附。

光谱优势：与绿色荧光团（如FITC）光谱重叠较小，适合多色检测中的紫色通道，避免信号串扰。

2. 连接机制：NHS酯与氨基的共价反应

反应原理：

特异性结合：在pH 7.0-9.0、室温条件下，NHS酯与蛋白质、抗体、核酸或多肽的伯胺基团（如赖氨酸侧链或N端氨基）发生亲核取代反应，形成稳定酰胺键。

反应效率：反应速率快（数分钟至1小时），无需催化剂，避免强酸/碱或氧化环境，保护生物分子活性。

标记密度控制：通过调节染料与目标分子的投料比（如1:5至1:20），平衡标记密度与空间位阻，避免高密度标记导致的荧光自淬灭。

3. 应用场景与优化策略

生物医学应用：

免疫检测：在流式细胞术、免疫荧光、ELISA中作为紫色通道探针，结合生物素-链霉亲和素系统实现信号放大（如每个抗体偶联3-8个染料分子，提升检测灵敏度）。

荧光成像：适用于厚组织深层成像，减少自发荧光干扰，支持超分辨技术（如STED）。

分子追踪：通过NHS酯标记细胞表面蛋白或核酸，结合链霉亲和素-荧光纳米颗粒实现高灵敏度追踪。

工艺优化：

反应条件：温和pH（7.0-8.5）、室温反应，避免高温或极端pH导致生物分子变性。

纯化步骤：反应后通过HPLC或凝胶过滤去除游离染料，减少非特异性结合。

稳定性提升：添加抗淬灭剂（如抗坏血酸）或稳定剂，延长荧光半衰期（＞10分钟）。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

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