AF350-streptavidin conjugate,AF350标记链霉亲和素偶联物的优势
产品名称:AF350-streptavidin conjugate,AF350标记链霉亲和素偶联物的优势
一、核心功能特性
荧光特性优势
光谱特性:AF350激发波长346nm,发射波长442nm,属紫外-蓝光区域,斯托克斯位移近100nm,显著减少荧光干扰,提升成像清晰度。量子产率约0.7,亮度高于传统蓝光染料(如AMCA),抗光漂白能力强,适合长时间观察。
多色兼容性:蓝光信号可与绿光(AF488)、红光(AF594)、远红光(AF647)等通道无串扰共存,支持4个以上靶点同时检测(如免疫荧光共定位实验中区分膜蛋白、细胞骨架、细胞核)。
链霉亲和素特性
高特异性结合:四聚体结构,每分子可结合4分子生物素,解离常数达10⁻¹⁴ mol/L,非特异性结合极低,等电点pH6.0,无糖基,稳定性良好。
信号放大:通过生物素-链霉亲和素系统实现信号放大,即使低丰度靶标也能产生强荧光信号,提升检测灵敏度。
二、核心优势
多场景应用能力
多色荧光成像:在共聚焦显微镜或流式细胞术中,蓝光通道与绿/红通道协同,实现细胞表面标志物、细胞器、细胞骨架等多靶点同时标记,减少实验步骤,提升效率。
低背景干扰:蓝光在厚组织中穿透力较弱,但在薄切片或细胞爬片中可减少深层组织荧光干扰,提升局部区域检测准确性,尤其适用于低表达靶标(如肿瘤标志物)的检测。
免疫检测与流式:广泛用于免疫荧光、原位杂交、流式细胞术,结合生物素化抗体/探针,实现高特异性、高灵敏度检测。
稳定性与操作性
化学稳定性:AF350在pH4-10范围内荧光强度稳定,链霉亲和素耐蛋白酶、极端pH及温度,偶联物在-20℃避光保存可长期稳定。
制备优化:通过调控pH、缓冲体系(如PBS/碳酸盐)、染料/蛋白比例(2-4:1),确保标记效率与生物活性,纯化后D/P值(染料/蛋白比)控制在2-4,平衡荧光强度与结合活性。
三、应用场景示例
免疫荧光与共定位
案例:用AF350-链霉亲和素标记生物素化抗CD3抗体,结合AF488标记抗α-tubulin抗体,实现T细胞表面CD3与细胞骨架的共定位成像,清晰区分亚细胞结构。
优势:蓝光通道低背景,提升信号噪比,尤其适合低表达抗原(如某些细胞表面受体)的检测。
流式细胞术与多色分析
案例:在多色流式中,AF350标记生物素化抗体检测细胞表面标志物,与AF594标记细胞核、AF647标记细胞质蛋白协同,实现4色以上细胞分型,提升数据维度。
优势:蓝光信号与绿/红/远红通道无串扰,减少补偿需求,提高检测准确性。
原位杂交与核酸检测
案例:AF350标记生物素化探针用于FISH(荧光原位杂交),检测特定基因序列,结合DAPI核染色,实现基因定位与细胞核结构同步观察。
优势:蓝光通道低自发荧光,提升信噪比,适合低拷贝数核酸检测。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

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