150408-83-6，5/6-TAMRA-NHS的实验应用操作

产品名称：150408-83-6，5/6-TAMRA-NHS的实验应用操作

 核心实验应用操作（分 3 大主流场景）

场景 1：蛋白 / 抗体标记（最常用，如 IgG、酶、多肽）

缓冲液调节：将待标记蛋白（浓度 1-10 mg/mL）用 PBS（pH 8.0）或 CB 缓冲液（pH 8.5）透析平衡，或用超滤管更换缓冲液，去除游离氨基杂质。

投料反应：按摩尔比 1:3~1:10（蛋白：5/6-TAMRA-NHS）加入储备液（过量标记提升成功率），轻轻混匀；室温避光反应 1-2 h，或 4℃避光反应过夜（适合敏感蛋白）。

备注：蛋白分子量小（如多肽）可适当提高摩尔比至 1:15，确保标记充分。

终止反应：加入 1 mol/L 甘氨酸溶液（终浓度 50 mmol/L），室温避光孵育 15 min，封闭未反应的 NHS 酯基团。

纯化产物：用凝胶过滤层析（Sephadex G-25 柱）或超滤管（截留分子量适配目标蛋白），去除未结合的游离 5/6-TAMRA，收集橙红色目标蛋白溶液，4℃避光短期保存，-20℃分装长期保存。

效率检测：用紫外分光光度计，分别测 280 nm（蛋白吸收峰）和 544 nm（TAMRA 吸收峰）吸光度，计算标记率（理想标记率 1-3 个荧光分子 / 1 个蛋白）。

场景 2：细胞层面应用（细胞表面氨基标记、靶点成像）

细胞预处理：取对数期细胞（如贴壁细胞、悬浮细胞），用预冷的 PBS 洗涤 2 次，去除培养基中血清（血清含蛋白氨基干扰反应）；贴壁细胞可直接在培养板操作，悬浮细胞离心（1000 rpm，5 min）重悬。

孵育标记：用无血清 PBS（pH 8.0）配制 5/6-TAMRA-NHS 工作液（终浓度 5-20 μmol/L），加入细胞体系，37℃避光孵育 30-60 min，期间轻摇 1-2 次。

洗涤去游离：孵育结束后，用含 1% BSA 的 PBS 洗涤细胞 3 次，彻底去除未结合的荧光探针，避免背景荧光干扰。

检测 / 成像：

流式细胞术：将细胞重悬于 PBS，上机检测橙红色荧光信号，分析标记阳性率；

荧光显微镜：贴壁细胞直接用抗荧光淬灭封片剂封片，激发光选 540 nm 左右，观察细胞表面 / 靶点荧光分布，拍照记录。

场景 3：氨基化核酸 / 材料标记（核酸探针、功能化载体）

氨基化核酸标记：

取氨基修饰的寡核苷酸（浓度 10-50 μmol/L，溶于无氨基缓冲液），加入 5/6-TAMRA-NHS 储备液（摩尔比 1:5~1:8），室温避光反应 2-4 h；

用高效液相色谱（HPLC）或 PAGE 电泳纯化，收集标记后的荧光核酸探针，用于核酸杂交、荧光定量检测。

氨基化材料标记（如氨基化微球、支架）：

材料用 CB 缓冲液（pH 8.5）浸泡活化 30 min，加入 5/6-TAMRA-NHS 工作液（终浓度 1-5 mmol/L），室温避光振荡反应 4-6 h；

用无水乙醇 + PBS 交替洗涤材料 3 次，去除游离探针，得到荧光标记材料，用于靶向示踪、材料分布检测。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

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