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Alexa Fluor 647 Phalloidin，AF647-鬼笔环肽，AF 647 Phalloidin

2026-05-19 分享

在细胞生物学与活细胞成像领域，肌动蛋白细胞骨架的精确可视化是理解细胞形态维持、迁移运动与力学信号传导的基础。Alexa Fluor 647 Phalloidin（Alexa Fluor 647 Phalloidin，又称AF647-Phalloidin、Alexa 647-Phalloidin Conjugate）是以鬼笔环肽（Phalloidin）为靶向骨架、Alexa Fluor 647为荧光报告基团的高性能标记试剂。鬼笔环肽是一种从毒鹅膏菌中提取的环状七肽，能以亚纳摩尔级亲和力特异性结合F-肌动蛋白（纤维状肌动蛋白）的沟槽，而几乎不与G-肌动蛋白（球状肌动蛋白单体）反应，这一特性使其成为标记细胞骨架的金标准工具。

Alexa Fluor 647的引入将该探针的性能推上了新台阶。其激发波长为650 nm，发射波长为668 nm，处于远红/近红外光谱区域，具有多重优势：一是远离细胞内源性荧光（如NADH、flavins等）的干扰波段，背景 *低；二是对活细胞光毒性显著低于紫外和蓝光激发的探针，适合长时间活细胞延时成像；三是与DAPI、FITC、Alexa 555等常用荧光染料的光谱分离度高，完美支持四色甚至五色同时成像。

在超分辨荧光显微镜技术中，AF647-Phalloidin的光稳定性使其特别适用于STORM与PALM等单分子定位方法。Alexa Fluor 647在还原性缓冲液中可实现可控的荧光闪烁，定位精度可达20 nm以下，从而揭示肌动蛋白丝的精细排列——如应力纤维的周期性结构、片状伪足中肌动蛋白网络的分支模式等。在共聚焦显微镜下，该探针可清晰呈现应力纤维、皮层肌动蛋白环、丝状伪足及收缩环等亚细胞结构的三维分布。

操作上，固定细胞通常使用3.3%多聚甲醛固定后，以0.1–0.5 µM的工作浓度在室温避光孵育20–60分钟即可获得高质量信号。值得注意的是，Phalloidin不能穿透完整的细胞膜，因此仅适用于固定细胞或经透化处理的样本。储存需-20℃避光干燥，配制好的工作液应现配现用。作为远红荧光细胞骨架标记的首选探针，AF647-Phalloidin在细胞力学与形态动力学研究中持续发挥着不可替代的作用。

屏幕截图2026-03-19103759.jpg

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