BSA-Liothyronine,牛血清白蛋白-三碘甲状腺原氨酸的制备
BSA-Liothyronine(牛血清白蛋白-三碘甲状腺原氨酸),是将三碘甲状腺原氨酸小分子半抗原与牛血清白蛋白共价偶联得到的结合物,主要用于生化层面的配体-蛋白相互作用机制研究。三碘甲状腺原氨酸本身是一种疏水性的小分子代谢物,单独状态下很难直接固定在固相载体表面开展互作分析,偶联到大分子BSA后,既保留了小分子的抗原表位结构,又获得了大分子的固相固定能力,为体外互作实验提供了理想的研究模型。
在代谢组学的小分子-蛋白结合谱筛选实验中,这款结合物常被固定在亲和层析树脂上,用来从细胞裂解液中钓取能与三碘甲状腺原氨酸发生特异性结合的未知蛋白,通过质谱鉴定得到完整的互作蛋白列表,进而构建完整的小分子代谢物的胞内互作网络。相较于直接将小分子固定在载体上的传统方法,BSA偶联的方式可以让三碘甲状腺原氨酸的活性表位充分暴露在溶液相中,避免固定过程中表位被载体遮蔽,大幅提升钓取实验的阳性率与结果可靠性。同时它也被用于等温滴定量热实验的对照体系,通过与游离三碘甲状腺原氨酸的滴定数据进行对比,可以精准计算出BSA载体对小分子结合亲和力的影响系数,修正后续其他小分子互作实验的计算偏差。
该结合物的制备通常采用碳二亚胺介导的共价偶联工艺,将三碘甲状腺原氨酸上的羧基与BSA表面的赖氨酸侧链氨基形成稳定的酰胺键,经过多次透析去除未反应的游离小分子后,采用紫外光谱法计算偶联比,通常控制在每摩尔BSA偶联8-12个三碘甲状腺原氨酸分子,既保证足够的配体密度,又不会因为配体过多导致BSA蛋白发生聚集。产品状态为无菌PBS缓冲液分装,4℃条件下可保存3个月,-20℃可长期储存。

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