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AF660‑Protein A/B，AF660标记重组蛋白A/B的制备工艺

2026-09-08 分享

AF660‑Protein A/B（AF660标记重组蛋白A/B），也称作Alexa Fluor660‑Recombinant Protein A/B，AF660‑Recombinant Protein A/B，AF660‑Protein A/B Conjugate，是将Alexa Fluor660远红荧光染料通过共价偶联修饰至基因工程重组表达的蛋白A与蛋白B得到的荧光探针试剂。重组蛋白A/B保留多个IgG Fc片段结合结构域，可特异性识别多物种免疫球蛋白Fc区域；AF660染料属于磺化改性花菁类远红荧光基团，激发波长663 nm，发射波长690 nm，适配633 nm、647 nm主流激光器，在pH4‑10区间荧光信号几乎不受pH波动干扰，光漂白抗性优于传统花菁染料，非常适合长时间成像采集实验数据。

该偶联物的制备工艺会严格控制染料取代度，规避高标记度带来的蛋白聚集、结合活性下降以及荧光自淬灭问题。重组蛋白A来源于金黄色葡萄球菌基因改造序列，蛋白B源自链球菌，二者结合谱略有差异，混合制剂可以拓宽可识别IgG亚型范围，降低物种局限性，适配不同来源一抗的检测需求。远红波段信号可以规避细胞样本内源自发荧光干扰，有效压低背景噪声，这一特性在厚组织切片成像、高背景细胞样本检测中优势尤为突出。

在多色荧光实验体系中，AF660‑Protein A/B可以和405 nm、488 nm、555 nm通道标记探针组合，搭建四通道及以上多色检测方案。在流式细胞分析中，该试剂可作为荧光二抗替代物，孵育结合细胞表面已结合的一抗，完成免疫球蛋白标记细胞亚群的分群统计；在共聚焦荧光显微成像中，用于固定细胞、组织切片的免疫荧光染色，定位目标抗原在胞内及膜上的空间分布；也可用于荧光印迹实验，在膜载体上示踪免疫复合物条带，实现非放射性的蛋白半定量分析。

试剂储存需要避光低温环境，反复冻融容易造成蛋白变性、荧光基团解离，配置工作液建议使用无叠氮钠中性缓冲溶液，部分荧光检测体系中叠氮根会微弱影响远红染料量子产率。实验过程中需要优化稀释比例，过高浓度会引发非特异性吸附，抬升背景信号，需要设置不加一抗的空白对照组，排除探针本身非特异结合带来的假阳性信号。凭借优异光谱稳定性与抗体结合活性，该探针成为多色免疫表征体系中重要的工具试剂。

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