Streptavidin Agarose,琼脂糖-链霉亲和素,Streptavidin Agarose Resin
Streptavidin, Agarose,琼脂糖-链霉亲和素,是将链霉亲和素共价固定在交联琼脂糖微球基质上的固相亲和介质,依靠链霉亲和素与生物素*强的非共价相互作用,实现生物素标记分子的捕获、富集与分离,是生物亲和色谱与固相捕获实验的核心固相材料。链霉亲和素来源于Streptomyces avidinii,为四聚体蛋白,单个四聚体拥有四个独立生物素结合口袋,可同时结合四分子生物素,解离常数可达10⁻¹⁵ M级别,相互作用*强。
与卵清亲和素相比,链霉亲和素无糖基化修饰,等电点偏低,可显著降低样品中带电生物大分子的非特异性吸附,减少背景干扰。基质采用交联琼脂糖微球,具备多孔网状结构,孔隙尺寸允许蛋白、多肽、核酸大分子进入微球内部,提升结合载量;微球机械强度良好,耐受常规层析柱压,可兼容重力流、离心捕获与低压层析多种操作模式。琼脂糖骨架化学惰性强,在常规生化缓冲体系中稳定,不易发生溶胀或者降解。
介质通常以含水悬浮液形式保存,储存温度2~8℃,不可冷冻,冷冻会破坏琼脂糖微球结构造成碎裂。该固相材料可捕获各类生物素标记分子,包括生物素化抗体、生物素化多肽、生物素标记核酸、生物素修饰的小分子探针等,广泛用于蛋白-核酸互作、蛋白复合物pull-down、亲和富集、固相免疫沉淀等实验。样品上样后,生物素标记分子被固定在微球表面;完成洗涤去除非特异性结合杂质后,可使用强变性条件完成目标分子洗脱。
操作过程中,上样缓冲液pH、离子强度需要合理调控,过高盐浓度或极端pH会影响结合效率。洗涤步骤是降低背景的关键,可选用中性缓冲液反复淋洗,去除吸附在微球表面的杂蛋白。该介质可重复使用,洗脱完成后,经缓冲液再生处理,能够多次循环捕获样品。该固相材料可用于微量目标分子富集,从复杂生物混合体系中特异性抓取带有生物素标签的组分,降低样品基质干扰,方便后续电泳、质谱等手段分析目标复合物组成。

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