哪种荧光染料比较常用?有哪些用途?
在荧光染料中,有几种染料因其独特的性质和广泛的应用而被认为是比较常用的。以下是一些比较常用的荧光染料及其主要应用领域:
1. 异硫氰酸荧光素(FITC)
特性:绿色荧光染料,激发波长接近488nm,发射波长为520nm(或525nm、517nm),光量子得率高。
应用:免疫荧光、流式细胞术、荧光显微镜技术等。它是目前常用的荧光标志物之一,能够与各种抗体蛋白结合,并在碱性溶液中稳定呈现荧光。
2. 藻红蛋白(PE)
特性:橙黄色荧光染料,吸收波长范围较广,吸收波长为566nm,发射波长为574nm。
应用:荧光标记物,特别是在流式细胞术和荧光显微镜中,用于标记抗体和其他生物分子。其强的长波长激发和发射荧光特性使其能够避免来自其他生物材料的荧光干扰。
3. Cy系列染料(如Cy3、Cy5)
特性:Cy系列染料是花青染料的系列衍生物,包括Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7等。这些染料的发射波长覆盖了从可见光到近红外光的范围。
应用:多色荧光成像、流式细胞术、FRET(荧光共振能量转移)试验等。Cy3和Cy5具有高亮度和稳定性,背景较弱,非常适合用于这些高级成像技术。
4. Alexa系列染料
特性:Alexa系列染料是以罗丹明为基础的系列标志物,具有高的量子得率、更好的光稳定性和充电特性,pH敏感度也更低。其激发光和发射光光谱覆盖大部分可见光和部分红外线光谱区域。
应用:蛋白质标记、细胞成像、流式细胞术等。Alexa系列染料因其多样的颜色选择、高亮度和稳定性而逐渐替代了传统的荧光染料。
5. 碘化丙啶(PI)
特性:不能透过细胞膜的DNA染色剂,与核酸结合后,激发波长为538nm,发射波长为617nm。
应用:区分活细胞和死细胞、细胞核染色、细胞周期分析等。PI常用于流式细胞术中,以区分细胞群中的活细胞和死细胞。
6. DAPI和Hoechst染料
特性:DAPI和Hoechst染料是两种常用的DNA染色剂,能够穿透细胞膜并与DNA的A-T富集区域结合。
应用:细胞核染色、细胞凋亡分析、染色体分析等。这些染料在荧光显微镜下能够提供清晰的细胞核图像,有助于研究细胞的结构和功能。
综上所述,这些荧光染料因其独特的荧光特性、广泛的应用领域和稳定性而被认为是常用的荧光染料。然而,具体选择哪种荧光染料取决于实验的具体需求和条件。