Cy3-streptavidin,荧光探针cy3标记链霉亲和素,合成路线
Cy3-streptavidin,荧光探针cy3标记链霉亲和素,合成路线
Cy3-streptavidin 是将 Cy3 荧光染料与链霉亲和素偶联形成的荧光探针。链霉亲和素是一种从链霉菌中提取的蛋白质,具有四个可与生物素特异性结合的位点,这种结合具有极高的亲和力和特异性。Cy3 的引入赋予了链霉亲和素荧光特性,使其在荧光检测和成像中具有重要应用价值。Cy3-streptavidin 可通过生物素 - 链霉亲和素特异性结合系统,与生物素标记的生物分子(如抗体、核酸、蛋白质等)快速结合,实现对目标生物分子的荧光标记,用于免疫分析、细胞成像、分子生物学研究等领域,能够直观地观察和分析生物分子的定位、分布和相互作用。
合成路线
合成 Cy3-streptavidin 主要包括 Cy3 的活化和与链霉亲和素的偶联两个关键步骤。首先,对 Cy3 荧光染料进行活化,将 Cy3-NHS(Cy3 的 N - 羟基琥珀酰亚胺酯)溶解在无水二甲基亚砜(DMSO)中,制备成高浓度的活化染料溶液。
然后,将链霉亲和素溶解在磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)中,缓慢加入上述活化的 Cy3-NHS 溶液,使 Cy3-NHS 与链霉亲和素的氨基发生反应。反应体系中,链霉亲和素与 Cy3-NHS 的摩尔比通常控制在 1:5 - 1:10 之间,以确保链霉亲和素上有足够的位点被 Cy3 标记。反应在室温下避光搅拌 1 - 2 小时,期间需注意防止溶液蒸发和荧光淬灭。
反应结束后,通过透析或凝胶过滤色谱法对产物进行纯化。透析时,将反应混合物装入透析袋中,置于大量的 PBS 缓冲液中,4℃条件下透析过夜,以去除未反应的 Cy3-NHS 和其他小分子杂质 。凝胶过滤色谱法则是利用不同分子大小的物质在凝胶柱中保留时间的差异进行分离,收集含有 Cy3-streptavidin 的洗脱峰,得到纯化的 Cy3-streptavidin 产物。纯化后的产物需进行浓度测定和荧光性能鉴定,确保其质量和活性满足实验要求。
名称:Cy3-streptavidin,荧光探针cy3标记链霉亲和素
纯度:95%+
性状:基于不同的分子量,呈白色 / 类白色固体,或液体。
溶剂:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常规有机溶剂。
储藏条件:-20°C干燥避光保存
包装规格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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