方格星虫SRP的聚乙二醇修饰及其防治高血压作用研究

方格星虫SRP的聚乙二醇修饰及其防治高血压作用研究

作者：药学

摘要：

目的：　　

1.采用高分子材料DSPE-PEG-NHS对方格星虫三肽SRP结构进行修饰，合成产物DSPE-PEG-SRP　　2.对合成产物的进行表征、体外释放和活性评价　　3.观察SRP、DSPE-PEG-NHS对人脐静脉内皮细胞毒性的影响　　

方法：　　

利用亲核反应原理修饰Ser-Arg-Pro（SRP），溶剂为N，N二甲基甲酰胺（DMF），三乙胺调节pH。薄层色谱监测反应进程，飞行时间质谱（MADLI-TOF-MS）、傅立叶变换红外光谱（FTIR）、扫描电镜（SEM）、核磁H谱（1H NMR）进行表征。对SRP、修饰后的SRP进行体外释放，并对SRP、产物和释放出的SRP进行活性评价；用MTT法测定SRP、DSPE-PEG-NHS对细胞毒性的影响。　　

结果：　　

1.DSPE-PEG-NHS与三肽SRP的摩尔比为1：4，溶剂为N，N二甲基甲酰胺（DMF），加入几滴三乙胺（TEA）调节pH值为8.3，反应时间为120h，将最终产物冷冻干燥后称重，其产率为45%。　　

2.利用薄层色谱法监测反应进程，结果表明有新物质生成，且产物的结构上无游离氨基酸存在。　　

3.飞行时间质谱（MADLI-TOF-MS）、傅立叶变换红外光谱（FTIR）、核磁氢谱（1H NMR）等表征实验均证明有新键的生成。　　

4.用扫描电镜（SEM）观察外观形态，结果表明未修饰的SRP结构和外观完整，呈球形，表面起皱；DSPE-PEG-NHS是平均疏松的结构，表面有较大的包裹体。合成产物DSPE-PEG-SRP外貌形态是包裹体上附着小球。　　

5.在体外释放实验中，SRP在7h内释放完全，而DSPE-PEG-SRP在相同时间内只能释放40%，到120h释放大约达到80%。吡啶-苯磺酰氯显色实验结果显示，SRP、DSPE-PEG-SRP和产物释放出的SRP活性分别为82%，1.4%，80.2%，表明产物需水解之后释放出SRP才能发挥活性。　　

6.对SRP、DSPE-PEG-SRP稳定性结果表明，SRP、DSPE-PEG-SRP的稳定性良好。　　

7.细胞毒性实验表明，原料SRP和DSPE-PEG-NHS对细胞无毒。　　

结论：　　

在课题组前期实验中，从方格星虫中分离纯化鉴定出来的肽中，SRP有较强的ACE抑制活性。由于其高ACE抑制活性，且生物利用度小，因此选择SRP进行结构修饰。根据体外释放实验结果表明，DSPE-PEG-SRP可持续释放120h，而未修饰的SRP只能释放7h。吡啶-苯磺酰氯显色实验结果表明DSPE-PEG-SRP的活性没有丧失；且在储存14天内其稳定性良好。细胞毒性实验表明SRP和DSPE-PEG-NHS对细胞无毒。

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