CY3-STAT1,CY3标记信号转导及转录激活因子1的反应条件
CY3-STAT1,CY3标记信号转导及转录激活因子1的反应条件
CY3-STAT1是指通过将荧光染料CY3标记在信号转导及转录激活因子1(Signal Transducer and Activator of Transcription 1,简称STAT1)分子上的荧光复合物。STAT1是一种重要的细胞内转录调控蛋白,具有多个赖氨酸残基,可作为染料共价结合的反应位点。其标记过程旨在保留STAT1的功能活性,同时赋予其可检测的荧光特性,便于用于细胞行为研究、分子追踪以及蛋白定位等实验。
CY3标记通常采用NHS酯活性的染料形式进行反应。反应条件的控制对于获得稳定且功能保留的CY3-STAT1至关重要。首先,待标记的STAT1蛋白需溶解于无胺类物质干扰的缓冲体系中,例如0.1 M碳酸盐缓冲液(pH 8.3)或HEPES缓冲液。反应pH控制在7.5至8.5之间,以促进CY3-NHS酯与STAT1中游离氨基之间的酰胺键形成。
在反应进行时,CY3-NHS酯需先以DMSO或DMF为溶剂溶解,随后逐滴加入到STAT1蛋白溶液中。反应体系通常在室温避光条件下轻柔搅拌1至3小时,以确保充分接触并减少蛋白变性风险。染料与蛋白的摩尔比建议控制在5:1至10:1之间,以确保标记效率并避免过度修饰影响蛋白功能。
反应完成后,需通过凝胶过滤、透析或HPLC方法去除游离未反应的染料。纯化过程也需维持在低温避光状态下,以避免染料降解。标记成功与否可通过紫外-可见吸收光谱和荧光光谱确认,同时也可通过SDS-PAGE观察标记后蛋白的迁移特性是否发生改变。
CY3-STAT1产物在纯化后通常以冻干粉或缓冲液形式储存于-20°C以下避光环境中,用于后续荧光成像、蛋白定位分析或功能检测等实验系统。整个反应条件设计强调温和性、可控性与标记效率的平衡,以确保标记蛋白的活性与荧光性能兼顾。
产品名称:CY3-STAT1,CY3标记信号转导及转录激活因子1
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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仅用于科研,不能用于人体。小编axc