CY3-Angiogenin,CY3标记血管生成素的反应机理
CY3-Angiogenin,CY3标记血管生成素的反应机理
CY3-Angiogenin是由血管生成素(Angiogenin)分子通过共价结合方式与荧光染料CY3连接而成的荧光标记蛋白。血管生成素是一类分子量较小的蛋白,结构中包含多个胺类反应基团,例如赖氨酸侧链氨基与蛋白N-末端氨基,这些活性位点为CY3标记提供了良好的化学反应基础。其标记过程的反应机理依赖于CY3染料上的NHS酯结构。
NHS酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯)是一种高反应性的中性活性酯,在适当的pH条件下能够与氨基类亲核试剂发生快速酰胺化反应。在CY3-Angiogenin的合成过程中,反应主要发生在血管生成素蛋白的游离氨基与CY3-NHS酯之间,通过亲核取代机制形成稳定的酰胺键。
具体而言,反应机理包括以下几个关键步骤:
在pH 7.5~8.5的缓冲液中,蛋白质分子上的氨基(-NH₂)被部分去质子化,形成具有亲核性的胺负离子。
CY3-NHS酯在有机溶剂(如DMSO)中预先溶解并缓慢加入蛋白质溶液。NHS酯在水溶液中稳定性有限,因此需控制加入时间与浓度,确保有效反应。
蛋白质氨基攻击NHS酯中的碳酰基中心,驱动酰胺键的形成,同时释放出N-羟基琥珀酰亚胺为副产物。
生成的CY3-Angiogenin中,染料通过共价酰胺键稳定连接于蛋白骨架上,染料分子不会轻易脱落或影响蛋白的空间构象。
反应完成后,利用分子筛、凝胶过滤或透析方法除去未反应的染料分子。CY3标记过程温和,对蛋白三维构象及其功能位点影响较小。标记产物可通过紫外-可见光吸收(在550 nm左右)与荧光激发/发射光谱确认。
这种基于酰胺键形成的反应机理具有反应效率高、共价键稳定、特异性好等特点,常用于多种蛋白质与小分子的荧光标记体系。CY3-Angiogenin可用于蛋白跟踪、受体结合分析或细胞定位等实验系统中,提供稳定且易检测的荧光信号。
产品名称:CY3-Angiogenin,CY3标记血管生成素
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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仅用于科研,不能用于人体。小编axc