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Cy3.5-COOH,花菁染料Cy3.5-羧基的反应条件与操作要点

2025-08-12 分享

产品名称:Cy3.5-COOH,花菁染料Cy3.5-羧基的反应条件与操作要点

反应条件与操作要点

羧基(-COOH)与氨基(-NH₂)的反应需通过活化剂(如EDC/NHS)催化,生成活性酯中间体,再与氨基发生酰胺化反应。关键操作要点如下:

活化步骤:

通常使用EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺)和NHS(N-羟基琥珀酰亚胺)共同活化羧基,生成NHS酯(活性更高,反应更高效)。

活化条件:pH 4.5-6.0(弱酸性),室温(20-25℃),反应时间10-30分钟(确保羧基充分活化)。

偶联步骤:

活化后的Cy3.5-COOH(含NHS酯)与含氨基的生物分子混合,pH调整至7.0-8.5(弱碱性),促进氨基对活性酯的亲核进攻,生成稳定的酰胺键。

反应时间:通常1-4小时(浓度高时缩短,低浓度时延长);温度:室温或37℃(加速反应,但需避免染料降解)。

溶剂:水性缓冲液(如PBS),可含少量有机溶剂(如1-5% DMSO)助溶染料,但需确保生物分子活性不受影响。

纯化:反应后需通过透析、凝胶过滤(如Sephadex G-25)或超滤去除未反应的染料、活化剂(EDC/NHS)及副产物(如脲),避免背景干扰。

储存与稳定性

储存条件:-20℃避光保存(干燥环境,避免反复冻融)。

稳定性:羧基在酸性或中性条件下较稳定,但活化后的NHS酯需立即使用(避免水解);染料部分对光、湿气敏感,需严格避光保存。长期储存可能导致染料氧化或羧基水解,需定期检测活性。

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

Cy3.5-COOH,花菁染料Cy3.5-羧基

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