Cyanine7-APC，Cy7-别藻蓝蛋白的合成过程

Cyanine7-APC，Cy7-别藻蓝蛋白的合成过程

Cy7-别藻蓝蛋白（Cyanine7-APC）是一种将近红外荧光染料Cyanine7（Cy7）共价标记于别藻蓝蛋白（Allophycocyanin, APC）上的功能性荧光探针。别藻蓝蛋白是一种来自蓝藻或红藻类的水溶性色素蛋白，为六聚体结构，具有强大的吸光能力和高度荧光量子产率。通过Cy7标记，可将其原本的可见光荧光扩展至近红外区域，实现多通道荧光检测和高灵敏度分子示踪。

合成过程

蛋白制备：

APC首先在缓冲液中溶解，常用PBS或磷酸盐缓冲液（pH 7.2–7.5），浓度控制在1–2 mg/mL范围内，确保蛋白稳定且未发生聚集。必要时可进行透析或滤过以去除低分子杂质。

染料活化：

Cy7通常以NHS酯形式提供，用于与蛋白表面的赖氨酸氨基形成稳定的酰胺键。溶解于DMSO或DMF中，确保染料溶解完全并保持活性。

偶联反应：

将Cy7-NHS酯缓慢加入APC溶液中，反应在4–25℃条件下进行2–4小时。pH保持在7–8，反应中可适当加入缓冲液以稳定蛋白结构。标记密度通过染料与蛋白的摩尔比控制，通常1:3至1:5，以在保证荧光信号强度的同时维持APC荧光特性和蛋白功能。

纯化：

偶联完成后，通过凝胶过滤（如Sephadex G-25）或透析去除未反应的自由Cy7染料，获得纯净的Cy7-APC。进一步可利用离子交换层析或超滤进行浓缩与缓冲交换，保证产品适合长期储存和实验应用。

表征：

光谱分析：APC吸收峰约为650 nm，Cy7标记后在近红外区域（约750 nm）出现吸收峰。

荧光测定：激发波长约650 nm或近红外波段，测定发射波长约770–780 nm，验证标记成功。

SDS-PAGE/荧光成像：确认蛋白分子量及标记均一性。

功能验证：保证APC荧光保留且结构完整，避免标记对蛋白六聚体结构破坏。

Cy7-APC结合了APC的高量子产率与Cy7的近红外荧光特性，应用于流式细胞术、多通道荧光标记及分子示踪实验，为高灵敏度检测提供可靠工具。

产品名称：Cyanine7-APC，Cy7-别藻蓝蛋白

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

推荐产品：

146368-11-8

水溶性CY5羧基Sulfo-Cy5-acid

210892-23-2

荧光染料Cy5.5——药物递送系统

1032678-07-1

Cy5-COOH

Cy5羧酸

1032678-07-1

仅用于科研，不能用于人体。小编axc