FITC-ConA，荧光素标记刀豆球蛋白A的制备方法

FITC-ConA，荧光素标记刀豆球蛋白A的制备方法

FITC-ConA 是通过荧光素异硫氰酸酯（FITC, Fluorescein Isothiocyanate）与刀豆球蛋白A（Concanavalin A, ConA）共价偶联形成的荧光标记蛋白分子，结合了 ConA 的特异性糖结合能力与 FITC 的绿色荧光示踪功能，应用于糖生物学研究、细胞膜糖基化分析、细胞成像及靶向分子检测。ConA 是一种来源于刀豆（Canavalia ensiformis）的四聚体凝集素，能够特异性识别 α-D-甘露糖和 α-D-葡萄糖残基，适用于糖蛋白、糖脂及多糖结构的标记与分析。通过 FITC 标记，ConA 可在荧光显微镜或流式细胞仪中实现可视化检测，提供直观的定量和定位信息。

FITC-ConA 的制备方法核心是利用 FITC 分子上的活性异硫氰酸酯基团（–N=C=S）与 ConA 分子中的赖氨酸 ε-氨基反应形成稳定的氨基甲酸酯键（–NH–C(=S)–），实现荧光团的共价固定，同时保持 ConA 的糖识别功能。制备通常在温和条件下进行，以避免蛋白质变性或活性丧失。

具体制备方法包括以下步骤：

缓冲体系准备：ConA 溶解于适宜缓冲液中（如 0.1 M 碳酸盐缓冲液，pH 8.0–9.0），保证蛋白质结构稳定，同时提供轻度碱性环境以促进异硫氰酸酯与氨基的亲核反应。

FITC 溶液制备：FITC 通常溶解于少量有机溶剂（如 DMSO 或乙醇）中，以制备高浓度的荧光标记试剂。溶液应避光操作，防止荧光团光降解。

偶联反应：将 FITC 溶液缓慢加入 ConA 缓冲液中，轻轻搅拌以保证均匀反应。反应时间通常为 2–4 小时，温度控制在室温或略低，避免高温引起蛋白质变性。FITC 与 ConA 的摩尔比可根据标记密度需求进行调节，一般控制在 2–5:1，以获得适中荧光强度而不影响蛋白质活性。

反应终止与稳定化：偶联反应完成后，可加入甘氨酸或氨基酸缓冲液封闭未反应的 FITC 分子，防止非特异性标记和荧光猝灭。

纯化：通过凝胶过滤（如 Sephadex G-25）或透析方法去除游离 FITC 和小分子杂质，获得纯净的 FITC-ConA。纯化过程中保持低温和避光，防止蛋白质降解及荧光衰减。

检测与表征：纯化后的 FITC-ConA 可通过紫外-可见吸收光谱和荧光光谱测定荧光强度及标记效率，同时可通过 SDS-PAGE 检测蛋白质完整性。标记效率一般通过荧光团与蛋白质的摩尔比计算，确保在不影响 ConA 糖结合活性的前提下获得合适的荧光信号。

FITC-ConA 具有水溶性良好、荧光稳定、特异性识别糖残基能力强等特点，可用于糖基化结构研究、细胞膜糖分析、组织切片染色及靶向标记实验。通过合理控制 FITC 与 ConA 的偶联比例和纯化条件，可获得兼具荧光示踪能力和生物活性的标记蛋白，应用于细胞生物学、糖生物学以及生物成像研究中。

产品名称：FITC-ConA，荧光素标记刀豆球蛋白A

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

状态：固体/粉末/溶液

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