FITC-Cortistatin-14,荧光素标记神经肽的化学组成
FITC-Cortistatin-14,荧光素标记神经肽的化学组成
FITC-Cortistatin-14 是通过荧光素异硫氰酸酯(FITC, Fluorescein Isothiocyanate)与神经肽 Cortistatin-14 共价偶联形成的荧光标记分子,将 Cortistatin-14 的神经调控活性与 FITC 的绿色荧光示踪能力相结合,为神经科学研究、细胞成像及靶向分子追踪提供高效工具。Cortistatin-14 是一种由 14 个氨基酸残基组成的短链神经肽,具有独特的环状结构和生物活性区域,能够调节神经信号传导及受体结合,其活性序列通常含有赖氨酸、半胱氨酸等可用于化学修饰的功能性氨基酸残基。
在化学组成上,FITC-Cortistatin-14 由 Cortistatin-14 肽链和 FITC 荧光团构成。FITC 分子上的活性异硫氰酸酯基团(–N=C=S)可以与肽链中的赖氨酸 ε-氨基或半胱氨酸侧链的巯基发生亲核反应,形成稳定的共价键(氨基甲酸酯键或硫代脲键),实现荧光标记。该偶联方式保证荧光团牢固附着在肽链上,同时不干扰 Cortistatin-14 的活性区域和生物学功能。
FITC-Cortistatin-14 的合成路线主要包括以下步骤:
肽链合成:Cortistatin-14 可通过固相肽合成(SPPS)方法制备。采用 Fmoc 或 Boc 保护策略,将氨基酸逐步接入固相载体上,通过重复脱保护和耦合步骤形成目标肽序列。肽合成完成后,进行树脂切割和保护基去除,获得结构的 Cortistatin-14。
肽纯化与表征:通过高效液相色谱(HPLC)对合成肽进行纯化,去除残留保护基和副产物,并通过质谱(MS)和氨基酸分析确认肽的分子量和序列完整性。
FITC 偶联反应:将纯化后的 Cortistatin-14 溶解于适宜缓冲液中(如 pH 8–9 的碳酸盐或磷酸盐缓冲液),然后缓慢加入 FITC 溶液(溶于 DMSO 或乙醇),在温和条件下反应 2–4 小时。FITC 与肽中的赖氨酸或半胱氨酸侧链反应形成稳定的共价键。偶联比例可根据所需荧光强度调控,一般控制在 1–3 个 FITC 分子与每个肽分子结合。
反应终止与封闭:反应完成后,通过加入甘氨酸或其他小分子胺封闭未反应的 FITC,防止非特异性标记并提高荧光稳定性。
纯化:通过凝胶过滤或反相 HPLC 去除游离 FITC 和低分子杂质,获得纯净的 FITC-Cortistatin-14。纯化过程中应保持低温和避光操作,以保护肽链结构及荧光团活性。
表征与质量控制:纯化后的 FITC-Cortistatin-14 可通过 HPLC 测定纯度,通过质谱或 MALDI-TOF 确认分子量,使用荧光光谱测定荧光信号强度和标记效率,确保分子既具有稳定的荧光特性,又保留 Cortistatin-14 的生物活性。
该合成路线兼顾肽链的结构完整性与荧光团的稳定偶联,实现了 FITC-Cortistatin-14 在细胞成像、神经信号研究及分子示踪实验中的应用。通过合理设计偶联位点与纯化流程,FITC-Cortistatin-14 可提供稳定、可观测的绿色荧光信号,同时保持神经肽的活性,为神经科学和生物成像研究提供可靠工具。
产品名称:FITC-Cortistatin-14,荧光素标记神经肽
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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仅用于科研,不能用于人体。小编axc