FITC-CSTSMLKAC,荧光素标标记心肌靶向肽的合成步骤
FITC-CSTSMLKAC,荧光素标标记心肌靶向肽的合成步骤
FITC-CSTSMLKAC 是将荧光素异硫氰酸酯(FITC, Fluorescein Isothiocyanate)与心肌靶向肽 CSTSMLKAC 共价偶联形成的荧光标记分子,兼具靶向识别和荧光示踪功能。CSTSMLKAC 是一种由八个氨基酸组成的短链多肽,其序列设计旨在识别心肌组织特定受体或细胞膜表面糖蛋白结构,实现选择性靶向。通过 FITC 标记,该多肽可用于心肌组织成像、药物载体追踪以及靶向输送系统的验证,为心血管研究提供高效实验工具。
FITC-CSTSMLKAC 的制备利用 FITC 的活性异硫氰酸酯基团(–N=C=S)与肽链中的赖氨酸或半胱氨酸残基的亲核氨基或巯基反应形成稳定的共价键,实现荧光标记。此偶联方式能够确保荧光团牢固连接,同时保留多肽的心肌靶向活性,适合生物成像和体外、体内实验应用。
合成步骤概述如下:
肽链合成:CSTSMLKAC 多肽可采用固相肽合成(SPPS)方法制备,使用 Fmoc 或 Boc 氨基酸保护策略,逐步将氨基酸接入固相载体上。每步合成完成后进行脱保护和偶联,直至获得完整序列。合成完成后进行树脂切割和保护基去除,得到游离肽链。
肽纯化:通过高效液相色谱(HPLC)进行纯化,去除未反应的保护基残留、未偶联的副产物和短链肽,获得高纯度的 CSTSMLKAC。随后通过质谱(MS)或氨基酸分析确认肽分子量及序列完整性,确保肽链结构正确。
FITC 偶联反应:将纯化后的 CSTSMLKAC 溶解于适宜缓冲液中(如 pH 8–9 的碳酸盐或磷酸盐缓冲液),保持温和条件以保护多肽活性。FITC 通常溶解于少量有机溶剂(如 DMSO 或乙醇)中,然后缓慢加入肽溶液中,轻轻搅拌使反应均匀。反应时间一般为 2–4 小时,温度控制在室温或略低。FITC 与肽中赖氨酸或半胱氨酸侧链反应形成稳定的氨基甲酸酯或硫代脲键。偶联摩尔比一般控制在 1–3:1,以确保标记效率和肽功能兼顾。
反应终止与封闭:反应完成后,通过加入甘氨酸或其他小分子胺封闭未反应的 FITC,防止非特异性标记,提高荧光信号稳定性。
纯化:利用透析或凝胶过滤(如 Sephadex G-25)去除游离 FITC 和低分子杂质,获得纯净的 FITC-CSTSMLKAC。纯化过程中应避光操作,以避免荧光衰减,并保持低温保护肽链结构。
表征:纯化后的 FITC-CSTSMLKAC 可通过 HPLC 检测纯度,质谱确认分子量,同时使用荧光光谱测定荧光信号强度和标记效率。终产物具有稳定的绿色荧光,可在显微镜或流式细胞仪中实现清晰的成像。
FITC-CSTSMLKAC 兼具心肌靶向识别能力和荧光示踪功能,可应用于心肌细胞标记、组织分布研究、靶向药物递送体系评估及分子成像实验。合理设计偶联条件和纯化流程,可在保持多肽生物活性的同时获得高效、稳定的荧光信号,为心血管研究和靶向分子研究提供可靠的实验工具。
产品名称:FITC-CSTSMLKAC,荧光素标标记心肌靶向肽
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
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仅用于科研,不能用于人体。小编axc