生物素标记蛋白的大致流程（含图）

什么是生物素化？生物素化是什么意思？

生物素化是指将化学物质或分子与生物素（biotin）结合在一起的过程。生物素是一种水溶性的维生素，也被称为维生素B7或维生素H，它在许多生物体的生物化学过程中发挥着重要作用。生物素可以通过化学合成或从天然来源（如食物中）获得。生物素化通常在生物实验室中用于标记和检测特定的分子或蛋白质，其中生物素与待检测的分子或蛋白质结合，然后可以通过生物素与其他分子之间的特异性相互作用来检测或纯化目标分子。

生物素标记的大致流程：

待标记物的蛋白浓度不能过低，如若浓度过低需经超滤浓缩等手段提高浓度至0.1mg/mL以上。

一个蛋白质可能被多个生物素标记，标记时，生物素与待标记物应有合适的比例，确保标记后不影响待标记物的活性。推荐生物素：抗原蛋白比例为1~3：1，生物素：抗体比例为5~20：1或根据标记试剂盒说明书推荐比例。

为减少空间位阻影响，基于检测灵敏度特异性等要求，可在生物素与被标记物之间加入交联臂结构。

如果偶联基团为氨基，待标记物的系统不得含有游离的氨基（Tris,氨基酸）、载体蛋白（BSA）或者其他干扰物，若有干扰物需要用标记缓冲液反复超滤确保其去除干净，若采用其他基团偶联试剂，待标记物系统亦不能有含对应的游离基团的物质。

如果待标记物为分子量较小的物质，在纯化过程中注意超滤管、脱盐柱、透析袋的截留分子量。

标记反应后的体积量至少在100μL以上，以达到纯化时的*小上样量。

标记反应完成后（氨基偶联体系），可在体系中加入适量的含游离含氨基小分子物质，中和游离的生物素活化试剂，提高纯化效率，减少后续反应的假阳性和高背景。

纯化后的标记蛋白可采用A280或BCA法测定蛋白含量。

标记纯化后的蛋白可根据蛋白性质进行分装长期保存，减少冻融次数。