FITC-Cholesterol，异硫氰酸荧光素标记胆固醇的反应条件与步骤

FITC-Cholesterol，异硫氰酸荧光素标记胆固醇的反应条件与步骤

胆固醇（Cholesterol, C₂₇H₄₆O）是一种甾体脂质，包含四环甾体骨架（A–D环）和一个羟基（–OH）在3位碳上，具有疏水性强、刚性骨架的特点。胆固醇在细胞膜中发挥稳定膜结构和信号调控作用。FITC-Cholesterol是通过异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate, FITC）与胆固醇衍生的氨基或酯化位点共价连接而形成的荧光标记化合物。标记后分子兼具胆固醇的疏水甾体骨架和FITC的绿色荧光特性（λ_max ~495 nm, λ_em ~520 nm），适用于膜模型研究和荧光追踪实验。

反应条件与步骤

胆固醇氨基衍生化

胆固醇羟基可通过酯化反应引入氨基衍生物（如胆固醇-6-氨基己酸酯），形成可与FITC反应的氨基位点。

反应通常在有机溶剂（如二氯甲烷、DMF）中进行，使用偶联剂（如DCC, EDC/NHS）促进羟基活化，温和条件下保护甾体结构。

FITC标记反应

FITC溶解于少量DMSO或乙醇中，与胆固醇氨基衍生物混合。

异硫氰酸基（–N=C=S）与氨基发生亲核加成生成稳定硫代脲键。

反应在弱碱性缓冲液（pH 8–9）中进行，低温（0–4℃）避光以防FITC光漂白，同时保持胆固醇骨架完整。

反应时间通常为2–4小时，确保反应充分。

纯化与表征

通过硅胶柱层析或透析去除未反应FITC和小分子副产物。

产物FITC-Cholesterol为单分散荧光分子，可通过UV-Vis和荧光光谱验证标记效率和荧光强度。

特性与应用

疏水性膜结合：FITC-Cholesterol可嵌入脂质膜或脂质体中，模拟胆固醇行为。

荧光追踪：用于膜运输、内吞、脂质动力学及胆固醇分布研究。

化学稳定性：硫代脲键在中性或弱碱环境下稳定，可长期储存。

应用价值：细胞膜研究、脂质动力学模拟、荧光脂质体构建、纳米载体表征及膜蛋白相互作用分析。

产品名称：FITC-Cholesterol，异硫氰酸荧光素标记胆固醇

纯度：95%+

规格：mg/g

用途：科研

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