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Alexa Fluor 488酪胺,AF488 Tyramide的关键应用场景

2025-10-11 分享

产品名称:Alexa Fluor 488酪胺,AF488 Tyramide的关键应用场景

1. 核心机制:酪胺信号放大(TSA)技术

原理:HRP催化过氧化氢氧化酪胺底物,生成高反应性自由基,与靶标区域(如抗原-抗体复合物附近)的酪氨酸残基共价结合,通过多轮沉积放大荧光信号,灵敏度可达标准方法的10-200倍。

优势:

高灵敏度:适用于低丰度靶标(如低表达蛋白、单拷贝DNA序列)的检测。

高信噪比:共价结合减少信号扩散,降低背景噪声,适合复杂组织背景。

稳定性:信号高度稳定,不易淬灭,支持后续多轮染色、探针去除及再标记。

2. 关键应用场景

免疫组化(IHC)/免疫细胞化学(ICC):检测组织切片或细胞中的低丰度蛋白、抗原或核酸序列,优化弱抗原可见性,提升诊断准确性。

原位杂交(ISH/FISH):增强RNA或DNA探针信号,实现低表达转录本或单拷贝DNA序列的高灵敏度检测。

流式细胞术:增强微量细胞内目标的荧光信号,提升检测灵敏度。

神经科学:追踪神经元路径、突触结构及轴突终末,研究神经回路与功能。

多重染色:支持多色成像(如与Cy3、Cy5联用),实现同一样本中多靶标的同时检测。

3. 实验操作要点

样本处理:

固定/透化:甲醇、多聚甲醛或Triton X-100处理,避免过度固定导致抗原掩蔽。

封闭:BSA、脱脂奶粉或鱼皮胶封闭非特异性位点,减少背景噪声。

酶处理:3% H₂O₂消除内源性过氧化物酶活性。

孵育与洗涤:

室温或37℃避光孵育5-10分钟,PBS/TBS洗涤3-5次,彻底去除未结合试剂。

HRP标记抗体或探针的使用需优化浓度和孵育时间。

检测系统:

荧光显微镜/共聚焦显微镜:选择FITC通道(激发495 nm/发射519 nm),调整激光功率和增益。

流式细胞术:设置补偿矩阵避免荧光溢漏,联合散射光(FSC/SSC)分析细胞亚群。

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

Alexa Fluor 488酪胺,AF488 Tyramide

关于我们:

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