Pacific Orange NHS Ester的化学结构与荧光特性
产品名称:Pacific Orange NHS Ester的化学结构与荧光特性
1. 化学结构与荧光特性
结构基础:以橙黄色荧光染料为核心(如Pacific Orange母体),通过NHS酯活性基团连接,分子量约389-720 g/mol(具体因供应商而异)。C5链或短连接臂增强空间灵活性,减少对生物分子构象的干扰。
荧光性能:
激发/发射波长:激发峰400-405 nm(紫光/蓝光区),发射峰550-551 nm(橙黄色荧光),量子产率高达0.9-0.97,光稳定性良好,抗光漂白能力强。
光谱特性:与Pacific Blue(455 nm)等染料兼容,支持多色荧光分析(如流式细胞术多参数检测),光谱重叠小,减少串扰。
pH适应性:在生理pH(4-10)范围内荧光稳定,兼容细胞内外环境。
2. 反应机制
特异性反应:NHS酯与氨基在碱性条件(pH 8.0-8.5,如碳酸氢钠缓冲液)下发生亲核取代,生成稳定酰胺键。反应需避光、室温或4℃进行,时间30分钟至4小时。
条件控制:
竞争反应:避免含胺缓冲液(如Tris、甘氨酸),防止非特异性标记。
水解抑制:NHS酯易水解,需现配现用,反应后通过透析、Sephadex G-25凝胶过滤或超滤离心去除游离染料。
摩尔比优化:染料与蛋白摩尔比通常为5:1至10:1,确保标记效率。
3. 应用领域
生物分子标记:标记蛋白质、抗体、核酸、肽链等,用于免疫荧光、Western blot、ELISA、流式细胞术(FACS)及共聚焦显微镜成像。
细胞成像:活细胞/固定细胞的亚细胞定位(如膜蛋白、细胞器标记),支持时间依赖性动态追踪。
多重标记与FRET:与Pacific系列(如Pacific Blue)、Cy系列染料组合,实现多通道荧光检测及荧光共振能量转移(FRET)实验。
分子探针构建:用于设计生物传感器、酶活性分析探针及高通量药物筛选。
温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

关于我们:
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