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FITC-Fibronectin,FITC-纤连蛋白的制备方法

2025-10-27 分享

产品名称:FITC-Fibronectin,FITC-纤连蛋白的制备方法

1. 核心组成与特性

组成:由纤连蛋白(细胞外基质糖蛋白,含多个功能结构域)与FITC通过共价键结合。FITC的异硫氰酸酯基团与纤连蛋白的氨基反应,形成稳定标记。

荧光特性:激发波长约495nm(蓝光),发射波长约520nm(绿光),适配荧光显微镜/共聚焦显微镜观察。

生物活性:保留纤连蛋白的原有功能,如与细胞表面整合素受体结合,参与细胞黏附、迁移、增殖及组织修复过程。

2. 制备方法

步骤:

纤连蛋白溶于0.1M碳酸钠缓冲液(pH9.0),浓度≥2mg/mL。

FITC溶解于无水DMSO(1mg/mL),按比例(如50μL FITC/1mL蛋白溶液)逐滴加入,4°C避光孵育8小时。

加入NH₄Cl(终浓度50mM)终止反应,2小时后通过凝胶过滤层析(分离范围20,000-50,000道尔顿)纯化,去除未结合的FITC。

产物储存于-20°C,避光,添加0.1%叠氮化钠防腐或1% BSA稳定。

质量控制:荧光素/蛋白比值(F/P)需控制在0.3-1.0,确保信号强度与背景干扰平衡。

3. 核心应用

细胞生物学研究:追踪纤连蛋白在细胞培养中的分布与动态变化,如细胞黏附、迁移、增殖及基质重塑过程(例如星形胶质细胞能量代谢研究)。

组织工程:作为生物支架材料,监测细胞与基质的相互作用,优化组织再生策略。

疾病研究:用于肿瘤转移、心血管疾病(如动脉粥样硬化)、神经退行性疾病(如阿尔茨海默病)中纤连蛋白功能异常的机制探索。

药物筛选:评估药物对细胞-基质相互作用的影响,辅助药物活性验证。

4. 储存与使用注意事项

储存:-20°C干燥避光保存,避免反复冻融。

操作:需在避光条件下进行,防止荧光淬灭;仅限科研用途,不可用于临床诊断或治疗。

生物活性验证:标记后需通过实验(如细胞黏附实验)确认纤连蛋白的生物功能是否保留,避免因标记导致的活性损失。

温馨提示:仅用于科研,不能用于人体实验!wyh

FITC-Fibronectin,FITC-纤连蛋白

关于我们:

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