AF488 蛋白标记试剂盒的应用场景

产品名称：AF488 蛋白标记试剂盒的应用场景

1. 反应机制

标记原理：NHS酯在弱碱性环境（pH 7.5-8.5）与伯胺反应，推荐使用碳酸氢钠缓冲液（100mM, pH 8.3-9.0），避免含氨基的缓冲液（如Tris、甘氨酸）或高浓度盐干扰。

优化条件：蛋白浓度需≥2mg/mL（最佳2-20mg/mL），染料与蛋白摩尔比通常为10:1至20:1；室温孵育30-60分钟，或4℃延长至2小时。

纯化要求：通过透析、凝胶过滤或预装离心柱去除游离染料，确保标记产物纯度；标记效率可通过A280/A494吸光度比值计算（ε494=71,000 M⁻¹cm⁻¹，ε280=203,000 M⁻¹cm⁻¹）。

2. 操作流程（以标准试剂盒为例）

实验准备：蛋白溶液恢复室温，置换液调整pH，染料溶解于无水DMSO（10mg/mL），避免水解失效。

标记步骤：

蛋白与置换液混合，离心浓缩至<300μL；

加入染料溶液，37℃孵育20分钟；

清洗液洗涤3次，离心去除未结合染料；

回收标记产物，可直接用于WB、ELISA或保存于-20℃（含甘油可延长稳定性）。

质量控制：通过BCA法测定蛋白浓度，荧光显微镜或流式细胞术验证标记效果。

3. 应用场景

细胞生物学：免疫荧光（IF）、流式细胞术（多色面板）、活细胞成像、蛋白质定位与动态追踪。

分子检测：免疫组化（IHC）、免疫印迹（WB）、ELISA、荧光共振能量转移（FRET）研究蛋白相互作用。

纳米材料：标记纳米颗粒、脂质体或量子点，用于靶向递送系统或功能化探针开发。

高通量分析：结合微孔板技术，实现蛋白定量、细胞分选及药物筛选。

4. 注意事项

储存与稳定性：严格避光、低温（-20℃至-80℃）保存，避免反复冻融；溶解后的染料需现配现用，防止NHS酯水解。

反应优化：根据目标蛋白特性调整染料比例（5-100μg染料/mg蛋白），通过梯度实验确定最佳条件；避免使用含硫醇（-SH）的还原剂（如DTT），可选用马来酰亚胺（Maleimide）替代。

安全与操作：佩戴防护装备（实验服、手套），在通风橱中操作；废液需密封处理，不得用于临床诊断或食用。

兼容性：标记后蛋白需避免与强光、高温或极端pH接触，长期保存建议添加蛋白稳定剂（如BSA）或甘油。

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！wyh

关于我们：

良林科研服务平台是西安瑞胜生物科技有限公司旗下的品牌，良林科研服务平台致力于服务全球研发工作者，公司配备了化合物合成、纯化、冻干、质量检测与分析等精密仪器，良好有完备的生产，研发，检测全生产线的能力。良林生物致力于为客户提供有机化合物定制合成及生产服务。 我公司生产销售科研级别的药物传递和药物纳米靶向方面的产品，公司目前经营的产品主要有合成磷脂，PEG衍生物，嵌段共聚物，纳米金，磁性纳米颗粒，介孔二氧化硅，活性荧光染料，荧光量子点，点击化学和大环配体等等。

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