5-CFDA-SE，5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯的偶联反应
5-CFDA-SE，5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯的偶联反应
5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯（5-Carboxyfluorescein Diacetate Succinimidyl Ester, 5-CFDA-SE）是一种功能化荧光探针，广泛应用于生物标记和细胞追踪实验。其分子结构由荧光素核心、两个乙酸酯化羟基以及5位羧基的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化酯组成。通过乙酸酯化修饰，分子能够顺利穿透细胞膜，而NHS活化酯为与生物分子上的氨基偶联提供高效反应位点。5-CFDA-SE的反应步骤主要包括溶解与反应条件控制、NHS酯与氨基偶联反应、酯水解释放荧光以及产物纯化四个环节。
首先，在溶解与反应条件准备阶段，5-CFDA-SE通常溶解于干燥、极性有机溶剂中，如二甲基亚砜（DMSO）、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺（DMF），以保持NHS酯的活性。溶液需避光以防止荧光分子光降解，同时避免水分接触，防止NHS酯水解。反应体系通常采用中性至弱碱性缓冲液（pH 7–8.5），确保氨基的亲核性，同时保持荧光分子结构稳定。
其次，NHS酯与氨基的偶联反应是核心步骤。在该步骤中，5-CFDA-SE中的NHS酯与蛋白质、多肽或其他含氨基的分子反应，形成稳定的酰胺键。反应机制为氨基亲核攻击NHS酯碳原子，生成酰胺键并释放NHS。偶联反应速率受pH值、温度、反应物浓度以及溶剂体系影响。通常在室温或低温条件下进行，以平衡反应速率与荧光分子稳定性。该步骤可通过控制摩尔比和反应时间调节标记密度，防止过度标记导致荧光猝灭或生物分子活性受损。
随后，进入乙酸酯水解阶段。在细胞内或缓冲液中，酯酶会水解分子上的二乙酸酯保护基，生成带羟基的活性荧光素。水解后的荧光素分子带负电荷，限制在细胞内或反应体系中，释放强烈绿色荧光（激发波长约490 nm，发射波长约520 nm）。这一步骤既实现细胞或分子标记，又保证荧光信号的稳定性和可追踪性。
最后，产物纯化与分析也是反应步骤中不可或缺的一环。偶联反应后，体系中通常存在未反应的5-CFDA-SE、NHS残余以及溶剂。可采用透析、凝胶过滤色谱或高效液相色谱（HPLC）进行分离纯化。纯化后的产物需检测荧光强度、吸收光谱和标记效率，以确保偶联成功并保持生物活性。纯化完成后，产物通常在低温、避光条件下储存，防止水解和光降解。
综上所述，5-CFDA-SE的反应步骤可分为四个关键环节：
溶解与反应条件准备——保证NHS酯活性和分子稳定；
NHS酯与氨基偶联——形成稳定酰胺键，实现生物分子标记；
乙酸酯水解——生成活性荧光素，实现可视化标记；
产物纯化与分析——去除未反应物和副产物，确保荧光信号稳定和生物相容性。
通过这些步骤，5-CFDA-SE能够高效、可控地将荧光信号引入蛋白质、多肽或细胞体系，为流式细胞分析、荧光显微成像及药物递送监测提供可靠工具。该反应体系兼顾分子化学活性和生物兼容性，为多功能生物标记和分子探针开发提供坚实基础。
产品名称：5-CFDA-SE，5-羧基二乙酰化荧光素琥珀酰亚胺酯
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研
产品目录
花菁染料CY3 Cy3 146397-20-8
花菁染料CY3.5 CY3.5 1284240-77-2
花菁染料CY3.5标记GE11 CY3.5-GE11
花菁染料CY3.5标记N-羟基琥珀酰亚胺酯 CY3.5-NHS 2231670-85-0
花菁染料CY3.5标记N-羟基琥珀酰亚胺酯，甲基， CY3.5-NHS，Methyl，
仅用于科研，不能用于人体。小编axc